传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果的比较
马宁芳1
张征宇1
黑常春2
王燕蓉2
1.广州医学院组织学与胚胎学教研室,广东省广州市,5101822.宁夏医学院组织学与胚胎学教研室,宁夏回族自治区银川市,750004
摘要：目的:比较传统及改良冻存法对人胎肝细胞保护效果,建立一种适合于人胎肝细胞冷冻保存的方法.方法:实验于2006-07/11在广州医学院进行.①人胎肝组织取自中期终止妊娠胎儿(20周,经胎儿亲属知情同意及医院伦理委员会批准).冷冻保护液包括A液(DMEM培养液含1.5 mol/L乙二醇+体积分数为0.2胎牛血清);B液(A液+0.1 mol/L蔗糖)两部分.②传统冻存法:用0.025%Ⅰ型胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞.胎肝细胞在A液、B液中分别渗透平衡20 min后,在冷冻保护B液中经液氮蒸汽冷平衡5 min后迅速入液氮冻存,1周后复苏培养观察.③改良冻存法:胎肝组织在A液、B液中分别渗透平衡20 min后,在冷冻保护液B液中经液氮蒸汽冷平衡5 min后迅速人液氮冻存,1周后复苏,入DMEM培养液37℃孵育1 h,胶原酶消化胎肝组织,分离、收集消化后的胎肝细胞培养观察.④新鲜分离的胎肝细胞做为对照组.⑤复苏后分离所得胎肝细胞用锥虫兰染色评估细胞活率,并记录贴壁时间,观察集落生长情况.结果:①锥虫兰染色结果显示传统冻存法复温后的胎肝细胞活率为(73.8±2.2)%,明显低于新鲜分离的胎肝细胞活率(89.2±3.6)%及改良冻存法所得胎肝细胞活率(82.5±4.2)%(P＜0.01).②贴壁情况观察发现新鲜胎肝细胞与改良冻存法胎肝细胞于培养24 h开始贴壁,而传统冻存法胎肝细胞贴壁时间滞后48 h.③新鲜胎肝细胞及改良冻存法胎肝细胞于第3天出现生长集落(细胞数＞10为一个集落),传统冻存法胎肝细胞在第5天出现生长集落,集落的数量低于改良冻存法及对照组(P＜0.01).结论:改良冻存法可避免冻存前损伤,提高细胞对冷冻的耐受性和冻存复温后细胞的活率.
关键词：胎肝低温保存改良法
分类号：R575(消化系及腹部疾病)
资助基金：广州医学院归国留学启动基金(2006GD051)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2814-2816,2825 )
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