以骨髓基质细胞为饲养层培养小鼠精原干细胞
徐富翠1
吴泽才2
韩艺1
吴绍华1
1.泸州医学院组织胚胎学教研室,四川省泸州市,6460002.泸州医学院附属医院检验科,四川省泸州市,646000
摘要：目的:建立精原干细胞与骨髓基质细胞共培养细胞模型,探讨骨髓基质细胞层支持精原干细胞扩增的可能机制.方法:实验于2004-03/2005-04在泸州医学院医学分子生物学实验室完成.以6～8 d龄小鼠为材料,脱颈处死后经体积分数为0.75的乙醇浸泡消毒,打开腹腔分离双侧睾丸,采用0.25%胰酶消化离心后培养睾丸细胞,采用差速贴壁法分离支持细胞与生精细胞.同时取小鼠胫骨骨髓,分离后用IMDM培养基培养,待细胞生长至单层时,以10 mg/L丝裂霉素C处理的原代培养骨髓基质细胞作为饲养层,并将分离后的生精细胞接种至饲养层上,以含体积分数为0.1的小牛血清的IMDM为培养基,37℃下共培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长特点,并对培养15 d的细胞进行苏木精-伊红染色、碱性磷酸酶染色及C-Kit受体检测.结果:①支持细胞在培养后4～6 h就开始贴附变形,此时生精细胞仍呈圆形,且悬浮于培养基中,将悬浮的圆形生精细胞吸出后接种于骨髓基质饲养层上共培养.培养8 h后,见体积较小的原形细胞开始贴附增殖,继续培养三四天后见体积相对较大的圆形细胞开始死亡,推测增殖较小的细胞为精原干细胞.增殖细胞的生长特点及形态学特征与文献报道精原干细胞的特征相符合.②苏木精-伊红染色显示培养的生殖细胞大小均匀,核大而圆着色深、胞质浅染、核质比高;碱性磷酸酶染色见胞质和细胞膜为阳性,C-Kit受体显示细胞膜呈强阳性,背景基质细胞为阴性.这些均符合精原干细胞的生物学特征.结论:精原干细胞在未加入细胞因子、原代培养的骨髓基质细胞饲养层中能较长时间生长并分裂增殖,推测骨髓基质细胞通过分泌生物活性物质和细胞黏附分子支持精原干细胞的扩增.
关键词：骨髓基质细胞饲养层精原干细胞
分类号：R394.2(医学遗传学)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2822-2825 )
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