新生鼠股骨破骨细胞存在位置的确定及其噬骨能力验证
王正东1
颜南2
李文海1
马骊3
1.沈阳医学院,解剖教研室,辽宁省沈阳市,1100342.沈阳医学院,公共卫生学院学生科,辽宁省沈阳市,1100343.沈阳医学院,外科教研室,辽宁省沈阳市,110034
摘要：目的:确定新生鼠体内破骨细胞的存在位置,观察分离纯化后的破骨细胞形态结构,并检测其噬骨能力.方法:实验于2006-07/11在沈阳医学院中心实验室完成.①市售新鲜成年牛股骨皮质,临用前锯成1 cm宽条,磨片机磨成厚50 μm的1 cm×1 cm骨片,乙醇浸泡,晾干,紫外线照射消毒骨片的两面,放于DMEM培养基中4℃备用.②选取新生大鼠10只,处死取其后肢股骨,于中间位置截成两段,多聚甲醛固定,甲苯胺蓝染色确定体内破骨细胞的存在位置,并进行形态结构观察.③另选取新生大鼠6只,处死取其四肢长骨,刮取骨髓腔内及干骺端表面直至骨干成为极微小的碎片,机械分离破骨细胞,胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化.④吉姆莎染色观察细胞形态结构,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞酶活性,扫描电镜观察破骨细胞形态结构,通过破骨细胞在骨片上的陷凹情况验证噬骨能力.结果:①鼠后肢股骨行甲苯胺兰染色,大量破骨细胞位于靠近干骺端骨小粱的骨陷凹中,核呈深蓝色,核大且多.②分离培养的破骨细胞数量较少,体积大,胞浆丰满,细胞突起延展,细胞核呈圆形或椭圆形,积聚在细胞中央或排列在细胞周边.胰蛋白酶+乙二胺四乙酸联合消化后可使混杂的单核基质细胞脱落,培养皿上大部分为多核巨细胞,破骨细胞纯化率达80%.③抗酒石酸酸性磷酸酶染色后的破骨细胞呈阳性表达,胞质内酶活性部位为红橙色.④成熟破骨细胞体积大,细胞突起延展,细胞周围出现伪足.破骨细胞在牛皮质骨片上培养时产生骨陷凹,吸收陷窝大部分呈梅花瓣形或腊肠形.结论:新生鼠体内破骨细胞多位于靠近干骺端骨小粱的骨陷凹中,具有噬骨能力,可使牛皮质骨片产生骨陷凹.为体外分析破骨细胞生物特性、骨吸收功能及骨组织工程应用提供丰富的细胞来源.
关键词：巨核细胞破骨细胞细胞培养技术组织构建
分类号：R329.4(人体形态学)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 3698-3700 )
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