人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞的诱导条件
万福生1
周红辉2
刘卓琦2
张少容3
1.南昌大学,医学院生化与分子生物学教研室,江西省南昌市,330006;南昌大学,实验动物科学部,江西省南昌市,3300062.南昌大学,医学院生化与分子生物学教研室,江西省南昌市,3300063.南昌大学,第二附属医院耳鼻喉科,江西省南昌市,330006
摘要：目的:分析人骨髓间充质干细胞分离、纯化、体外扩增及其向软骨细胞分化的条件,为人骨髓间充质干细胞用于修复损伤的软骨组织提供依据.方法:实验于2005-03/2006-04在南昌大学医学院生化与分子生物学教研室完成.实验材料:无菌条件下采集无血液系统疾病和家族遗传史的28～65岁成人骨髓8份,进行骨髓间充质干细胞分离与培养,骨髓采集经患者及医院同意,并签署知情同意书.实验方法:取第3代对数生长期骨髓间充质干细胞,实验组使用特定的、内含2 mg/L胰岛素、3 mg/L转铁蛋白、1 mmol/L丙酮酸、100 nmol/L地塞米松和10μg/L转化生长因子β1的低糖DMEM培养基诱导人骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化,对照组细胞以低糖DMEM基础培养液培养.倒置显微镜下观察细胞形态,诱导7,14 d采用半定量RT-PCR方法检测细胞软骨特异性Ⅱ型胶原表达,蕃红花O-亮绿染色分析蛋白多糖粘多糖含量,观察细胞分化情况.结果:①光镜观察成人骨髓间充质干细胞的形态变化:培养7 d细胞集落明显,集落中央为数个至数十个圆形细胞,周围变形细胞围绕中央细胞呈放射状生长.培养14 d细胞呈平行状或旋涡状排布,细胞排列紧密.②骨髓间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化:实验组细胞生长较对照组慢,培养7 d后细胞大多呈椭圆形或三角形,部分细胞伸出似触角突起,培养14 d细胞变形较明显,排列较为紧密,细胞突起多见,突起间相连,呈较明显软骨细胞形态特征.③骨髓间充质干细胞的番红花-O染色:实验组骨髓间充质干细胞蕃红花O-亮绿呈深染色,对照组人骨髓间充质干细胞呈阴性染色.④RT-PCR检测软骨特异性的Ⅱ型胶原COL2A1 mRNA表达:实验组诱导培养7,14 d人骨髓间充质干细胞有Ⅱ型胶原COL2A1 mRNA表达,400～500 bp条带间可见明显的荧光条带,诱导培养14 d时表达更明显.对照组未见Ⅱ型胶原COL2A 1mRNA表达.结论:采用直接贴壁培养法成功分离和培养出人骨髓间充质干细胞,并将人骨髓间充质干细胞诱导分化成软骨细胞,该软骨细胞具有软骨细胞的形态、生化特征.
关键词：人骨髓细胞间充质干细胞软骨细胞诱导分化
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：江西省卫生厅科研项目(2004B03)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3920-3923 )
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