人骨肉瘤细胞株U2-OS中分离并鉴定肿瘤干细胞
欧阳振
王栓科
康学文
王翠芳
汪静
郭洪章
1.兰州大学第二医院骨科研究所,甘肃省兰州市,7300002.兰州大学第二医院骨科研究所,甘肃省兰州市,7300003.兰州大学第二医院骨科研究所,甘肃省兰州市,7300004.兰州大学第二医院骨科研究所,甘肃省兰州市,7300005.兰州大学第二医院骨科研究所,甘肃省兰州市,7300006.兰州大学第二医院骨科研究所,甘肃省兰州市,730000
摘要：目的:采用无血清培养法从人骨肉瘤细胞株U2-OS中分离肿瘤干细胞,检测肿瘤干细胞特异性标志物Stro-1的表达.方法:实验于2006-02/2007-02在兰州大学第二医院骨科研究所完成.①实验材料:人骨肉瘤细胞株U2-OS由中国科学院细胞库提供;DMEM/F12(1∶1)培养基(Gibco公司);胎牛血清(杭州四季青公司);PCR引物由上海生物工程公司合成.②实验方法:取原代培养的骨肉瘤细胞经胰蛋白酶消化制备单细胞悬液,用含表皮生长因子20 μg/L、碱性成纤维细胞生长因子20 μg/L、L-谷氨酰胺2 mmol/L、胰岛素4 U/L、青霉素100 U/mL和链霉素100 U/mL,pH 7.2～7.5的无血清DMEM/F12培养基重悬细胞,常规培养5～7 d,待培养基中悬浮的肉瘤细胞球体积较大后,用无血清培养基重新吹打成单细胞悬液,按1∶2或1∶3比例传代.③实验评估:从上述骨肉瘤细胞株中分离出的肿瘤细胞球,用MTT法检测其增殖能力,免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞,反转录-聚合酶链法检测Stro-1阳性细胞中Stro-1 mRNA的表达,免疫细胞化学染色的方法检测分化后成骨细胞特异性抗原的表达.结果:①肿瘤干细胞增殖活性:增殖潜伏期约为24 h,传代后1～2 d即可见肿瘤干细胞形成,以后体积逐渐增大.第7天吸光度值最高,与0 d吸光度值比较差异有显著性意义(P＜0.01).②免疫磁珠法分选Stro-1阳性细胞:分选的Stro-1+细胞接种于无血清培养基后,24～48 h即可形成和原代肿瘤干细胞球形态一样的干细胞球,而Stro-1-细胞却不能形成肿瘤细胞球.③骨肉瘤干细胞中Stro-1 mRNA的表达:Stro-1+细胞和Stro-1-细胞mRNA扩增产物的吸光度值二者比较差异有显著性意义(P＜0.05).④肿瘤干细胞分化:分化2周的肿瘤干细胞骨形态蛋白及Ⅰ型胶原酶均呈阳性表达.结论:骨肉瘤细胞株中存在骨肉瘤干细胞,并具有自我更新和多向分化的能力.
关键词：骨肉瘤细胞株分离培养分化肿瘤干细胞
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：甘肃省科技厅科研基金(QSO61C3332)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 4706-4709 )
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