血管内皮生长因子C靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测
周慧聪1
张艳2
亢春彦3
李继昌1
1.郑州大学第一附属医院消化内科,河南省郑州市,4500522.郑州大学基础医学院药理教研室,河南省郑州市,4500523.河南省职工医学院病理教研室,河南省郑州市,450052
摘要：目的:构建针对人血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,并观察其在胃癌细胞中的干扰效果.方法:实验于2006-02/2007-02在河南省分子医学重点学科开放实验室完成.①实验材料:小干扰RNA表达载体pSilencer3.1为美国Ambion公司产品;胃癌细胞SGC7901为河南省分子医学重点学科开放实验室保存;血管内皮生长因子C基因的干扰片断和聚合酶链反应引物(152 bp)由上海生工生物公司合成.②实验过程:根据pSilencer3.1-H1载体要求设计靶向血管内皮生长因子C基因的两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点,构建重组表达质粒.经酶切和测序鉴定后分别转染胃癌细胞株SGC-7901,经G418筛选,获得稳定表达的细胞株.③实验评估:采用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测血管内皮生长因子C mRNA和蛋白水平的表达.结果:①重组质粒的酶切、核苷酸序列分析结果:经酶切和测序鉴定证实成功构建了血管内皮生长因子C小干扰RNA表达载体,建立了稳定转染细胞株.②稳定转染的细胞株中血管内皮生长因子C mRNA和蛋白表达:反转录-聚合酶链反应和Western blot显示转染后血管内皮生长因子C表达与对照组相比有不同程度的降低,以pSilencer3.1-neo-VEGF-C1尤为明显,抑制血管内皮生长因子C表达,不影响细胞的生长.结论:成功构建了血管内皮生长因子C小于扰RNA表达载体及稳定转染的胃癌细胞株.
关键词：RNA小分子干扰:血管内皮生长因子C组织构建
分类号：R318(医用一般科学)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 6379-6382 )
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