精原干细胞在成骨培养条件下的生物学特征
胡红梅1
徐富翠2
李伟1
吴绍华2
1.井冈山学院医学院,江西省吉安市,3430002.卢洲医学院组织胚胎学教研室,四川省卢州市,646000
摘要：目的:观察小鼠精原干细胞在成骨培养条件下的生物学特征,为探讨精原干细胞的多向分化能力提供实验依据.方法:实验于2006-03/2007-01在泸州医学院医学分子生物学实验室完成.(①实验材料:生后6～8 d左右昆明系小白鼠,雌雄均可,由泸州医学院动物科提供.②实验方法:取7～10 d小白鼠双侧股骨和胫骨,制备骨髓基质饲养层.取6～8 d雄性小鼠,脱颈椎处死后,无菌取出睾丸,进行精原干细胞分离、培养与鉴定.取培养3 d的精原干细胞,分为两组:对照组用基本培养液(IMDM+100 U/mL青霉素+100 U/mL链霉素+10%胎牛血清)培养,实验组用条件培养液培养(基本培养液中添加50 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、10-6 mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、50 nmol/L胰岛素、20 nmol/L碱性成纤维细胞生长因子)培养.③实验评估:在倒置显微镜下观察细胞的形态学变化、紫外分光光度仪动态检测上清液中碱性磷酸酶活性变化、免疫荧光法检测细胞内Ⅰ型胶原的表达.结果:①细胞形态学特征变化:实验组精原干细胞在成骨条件培养液中较对照组细胞贴壁生长快,条件培养3～6 d后见细胞生长迅速,呈集落样增长,细胞立体感增强,但未见明显细胞间桥;诱导培养15 d见细胞增殖达高峰,增殖细胞的胞质间桥仍不明显.②Ⅰ型胶原免疫荧光检测结果:实验组细胞浆内出现绿色荧光,呈阳性反应,对照组细胞呈阴性反应.③培养上清液碱性磷酸酶活性变化:实验组与对照组培养上清液中的碱性磷酸酶活性开始很低,以后逐渐增强.实验组培养上清液的碱性磷酸酶活性每个时间段都明显高于对照组(P＜0.05).结论:小鼠精原干细胞在成骨诱导培养条件下能快速增殖,增殖过程中表现出成骨细胞的某些生物学特征,这为进一步研究精原干细胞的多向分化潜能提供实验参考.
关键词：精原干细胞细胞培养成骨细胞生物学特征
分类号：R394.2(医学遗传学)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 6611-6614 )
英文信息