心肌病大鼠骨髓间充质干细胞移植后差异表达基因cDNA文库的构建
李杨1
陈沅2
田杰2
邱俊3
朱静2
张小飞2
1.重庆医科大学儿童医院心血管内科,重庆市,400014;解放军第三军医大学野战外科研究所四室,重庆市,4000422.重庆医科大学儿童医院心血管内科,重庆市,4000143.重庆市第九人民医院儿科,重庆市,400700
摘要：目的:构建心肌病大鼠移植骨髓间充质干细胞后心肌差异表达基因的cDNA文库,为后续的基因测序和信息学分析打下基础.方法:实验于2003-07/2005-03在重庆医科大学儿童医院儿科研究所和解放军第三军医大学野战外科研究所四室完成.实验材料:雌性Wistar大鼠54只,体质量(200±20)g,由解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心提供.实验方法:采用贴壁筛选法分离、扩增、纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,选用第三、四代的骨髓间充质干细胞用于移植实验.采用2.5 mg/kg阿霉素腹腔注射法建立大鼠心肌病心力衰竭模型.并分为实验组与对照组:实验组于左心室前壁靠心尖处注射骨髓间充质干细胞,对照组注射培养基.采用抑制性消减杂交技术构建骨髓间充质干细胞移植1周后大鼠心肌组织的差减文库.结果:①对照组和实验组移植前左室射血分数与左室缩短分数相比无差异,实验组左室射血分数与左室缩短分数在移植2周时明显高于对照组(P＞0.05,P＞0.01).②以正向消减产物为模板,在第33个循环才出现明显的G3PGH条带,而在非消减的对照中,第18个循环就能看见明显的条带,二者相差约15个PCR循环,同样在反向消减中二者相差也是15个PCR循环.按抑制性消减杂交方法的要求,只要二者之间相差5个循环以上就表明消减效率很高,可以用于下一步文库构建和筛选.③筛选出骨髓间充质干细胞移植后表达增高的cDNA克隆123个;表达降低的cDNA克隆28个.结论:运用抑制性消减杂交方法成功构建了骨髓间充质干细胞移植后心肌病大鼠的cDNA文库,为下一步研究打下基础.
关键词：抑制性消减杂交骨髓间充质干细胞心肌病心功能
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30371499)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 7365-7368 )
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