脑源性神经营养因子促进神经干细胞在体内外的定向分化
黄保胜
李立新
谢青松
田和平
胡卫星
傅震
1.南京医科大学第一附属医院神经外科,江苏省南京市,2100292.南京医科大学第一附属医院神经外科,江苏省南京市,2100293.南京医科大学第一附属医院神经外科,江苏省南京市,2100294.南京医科大学第一附属医院神经外科,江苏省南京市,2100295.南京医科大学第一附属医院神经外科,江苏省南京市,2100296.南京医科大学第一附属医院神经外科,江苏省南京市,210029
摘要：目的:观察脑源性神经营养因子促进神经干细胞在体内外条件下定向分化的作用,探索神经干细胞在体内外定向分化的规律.方法:实验于2006-09/2007-04在南京医科大学分子生物学实验室和动物实验中心完成.①体外研究:取孕14～16 d的胚胎大鼠脑组织,以无血清培养基培养获得神经干细胞,随即分成两组进行体外研究.实验组(n=10),加入5%胎牛血清和20 μg/L脑源性神经营养因子诱导其体外条件下定向分化,对照组(n=10),仅加入5%胎牛血清,用免疫荧光及流式细胞仪的方法来检测定向分化得到的神经元及其比例.②体内研究:参照Bavetta等的方法制作大鼠脊髓(T10)右半切4 mm长块状缺损模型.实验组(n=10):注射移植溴脱氧尿苷标记的细胞密度为1×109 L-1的神经干细胞悬液20μL.对照组(n=10):注射移植20 μL PBS于模型动物中.12周后,行辣根过氧化物酶神经逆行示踪评价脊髓感觉和传导功能的恢复程度,并取损伤处脊髓组织行免疫组织化学染色,观察缺损处打入的神经干细胞的存活,分化和迁移情况.结果:参加体内实验的20只大鼠均进入结果分析.①体外条件下,两组神经干细胞定向分化后均得到微管相关蛋白2阳性神经元,并且实验组微管相关蛋白2阳性神经元的比例在分化后第3天达最高峰,约为60%,而同期对照组仅约为30%,差异有统计学意义(P＜0.05).②体内条件下,移植12周后,免疫组织化学染色显示:体内实验组损伤脊髓处可见溴脱氧尿苷标记的阳性细胞,且缺损处可见大量神经微丝相关蛋白和神经生长相关蛋白染色阳性的神经元,体内对照组则未见以上两种蛋白染色阳性的神经元.辣根过氧化物酶神经逆行示踪显示:体内实验组脑组织可见到部分辣根过氧化物酶标记阳性神经元,而体内对照组未见辣根过氧化物酶阳性神经元.结论:脑源性神经营养因子促进神经干细胞体内外条件下定向分化为神经元,3 d达分化高峰.在体内条件下,外源的神经干细胞能存活、分化、迁移并替代修复脊髓神经传导束,有利于受损的脊髓功能恢复.
关键词：神经干细胞脑源性神经营养因子神经元定向分化
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：江苏省一三五工程医学重点人才基金(RC2003086)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 7353-7357 )
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