诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶
井绪东
陈丽
何冬梅
张洹
1.暨南大学医学院血液病研究所,广东省广州市,5106322.暨南大学医学院血液病研究所,广东省广州市,5106323.暨南大学医学院血液病研究所,广东省广州市,5106324.暨南大学医学院血液病研究所,广东省广州市,510632
摘要：目的:胆碱乙酰化转移酶是胆碱能神经系统功能变化的重要标记.观察大鼠骨髓间充质干细胞表达神经胆碱乙酰化转移酶的情况,探讨其定向诱导分化为特异胆碱能神经元的有效条件.方法:实验于2006-09/2007-05在暨南大学医学院血液病研究完成.①实验方法:SD大鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下取股骨,从骨髓中分离间充质干细胞,待80%～90%融合后胰酶消化传代.体外培养传3代后,向胆碱乙酰化转移酶阳性神经细胞进行诱导分化.实验Ⅰ组:DMEM/F12+0.1 mmol/L 2-巯基乙醇+1 mmol/L维甲酸诱导2 d.实验Ⅱ组:体积分数为0.1的胎牛血清+10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子+0.1 mmol/L 2-巯基乙醇预诱导2 d,换液后再加入1 mmol/L 维甲酸、10 μg/L表皮生长因子、10 μg/L 神经生长因子继续诱导7 d.实验Ⅲ组:在Ⅱ组方案的基础上加入1 250 u/mL Heparin.空白对照组不作任何处理.②实验评估:观察间充质干细胞诱导后的形态变化;诱导9 d,采用RT-PCR检测及凝胶电泳分析实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达;诱导2,9 d,以CY3间接免疫荧光法检测各组胆碱乙酰化转移酶阳性细胞分化情况.结果:①骨髓间充质干细胞诱导后形态学变化:诱导1 d细胞形态逐渐由长梭形变为圆形或椭圆形,折光性及立体感增强,部分细胞可见突起开始形成;诱导2 d细胞突起伸长,胞间或细胞与间质可形成连接;诱导9 d细胞突起变粗,胞浆内分泌颗粒增加并见胞核.②胆碱乙酰化转移酶mRNA的表达:诱导后的细胞高表达胆碱乙酰化转移酶mRNA.③胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞检测:实验Ⅱ组胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率为80%～90%,明显高于实验Ⅰ组的50%～70%,且细胞生长状态较好;实验Ⅲ组细胞脱壁死亡率最高,亦有较高的胆碱乙酰化转移酶阳性分化细胞表达率.结论:①鼠骨髓间充质干细胞能被转化为表达神经胆碱乙酰化转移酶的细胞.②胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子、2-巯基乙醇预诱导后,再加入维甲酸、表皮生长因子、神经生长因子继续诱导是分化为特异胆碱能神经元的有效条件.
关键词：间充质干细胞胆碱乙酰化转移酶生长因子
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国务院侨办重点学科建设基金(51205002)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 8435-8438 )
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