壳聚糖基因转移载体在关节软骨细胞中表达的定量分析
金才益1
王斌1
曾忠友1
陆永强1
董喜凤2
张晓玲2
1.武装警察部队浙江省总队医院骨科,浙江省嘉兴市,3140002.中国科学院上海生命科学研究院,上海交通大学医学院健康科学研究所,上海市,200025
摘要：目的:壳聚糖作为基因转移的载体存在着转染效率的问题.实验对壳聚糖介导的报告基因增强型绿色荧光蛋白在关节软骨细胞中的基因表达效率进行定量分析.方法:实验于2005-09/2006-06在健康科学研究所骨科细胞与分子生物学实验室完成.①实验材料:壳聚糖购自Sigma公司;荧光质粒pEGFP-C3为Clontech公司产品;成年新西兰白兔2只.②实验分组:实验分为空白对照组(软骨细胞不转染)、裸质粒pEGFP-C3对照组和壳聚糖-pEGFP转染组.③实验过程:软骨细胞取自新西兰白兔的关节软骨.以多聚糖壳聚糖为载体,荧光质粒pEGFP-C3作为报告基因,利用高速震荡法制备壳聚糖-pEGFP超微颗粒,用制备的携带不同量(1,2,3,4,5 μg)DNA的壳聚糖-pEGFP超微颗粒对软骨细胞进行体外转染.裸质粒pEGFP-C3对照组加入等量的DNA.④实验评估:光镜观察软骨细胞及壳聚糖-DNA超微颗粒的形态;荧光显微镜观察不同条件下绿色荧光蛋白的表达并进行定量分析.结果:①光镜下观察空白对照组,裸质粒pEGFP-C3对照组及壳聚糖-pEGFP转染组,软骨细胞形态均呈多角形,贴壁生长,增长活跃,转染组软骨细胞周围黏附有大量的球形小颗粒;制备的壳聚糖-DNA超微颗粒大小均匀,直径大约在150～300 nm.②在壳聚糖-pEGFP超微颗粒转染的软骨细胞中观察到有绿色荧光蛋白的表达,且DNA含量在1～5 μg范围内,细胞的转染效率和表达效率随颗粒包被的DNA量的增加而增加.结论:壳聚糖在关节基因转移中具有一定的体外DNA导入的功能,且随壳聚糖-pEGFP超微颗粒所携带的DNA量的增加转染效率和表达效率增加,经进一步研究它有望成为一种关节体内基因导入的有效工具.
关键词：壳聚糖基因转染软骨细胞组织构建
分类号：R329(人体形态学)
资助基金：武警浙江总队医院横向合作项目(0536J1A181)中国博士后科学基金(2004035468)上海市博士后科研项目(04R214119)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 9035-9038 )
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