重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白在骨髓间充质干细胞中的表达
鲍翠玉1
郭军2
郑敏1
马世玉1
1.咸宁学院心血管疾病研究所,湖北省咸宁市,4371002.咸宁学院心血管疾病研究所,湖北省咸宁市,437100;武汉大学人民医院心内科,湖北省武汉市,430060
摘要：目的:重组腺相关病毒是携带治疗目的基因的有效载体,骨髓间充质干细胞则可作为外源基因的载体和表达场所.实验选择携带绿色荧光蛋白的腺相关病毒体外转染骨髓间充质干细胞,观察转染效果.方法:实验于2006-01/12在咸宁学院心血管疾病研究所和武汉大学心内科实验室完成.清洁级成年SD大鼠6只,由武汉大学医学院试验动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体由北京本元正阳基因技术公司提供,基因启动子为CMV,有效滴度4×1011 v.g/mL.全骨髓法分离大鼠骨髓间充质干细胞,于体积分数为0.1的胎牛血清中培养,扩增纯化至第3代.按感染复数分别为102,103,104,105 v.g/cell加入携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒.于4,8,24,48 h倒置相差荧光显微镜下观察腺相关病毒感染骨髓间充质干细胞的状态,随机记录200个细胞中增强型绿色荧光蛋白阳性表达率,计算感染效率.结果:①骨髓间充质干细胞转染效率:感染复数为103,104,105 v.g/cell时,转染8 h后骨髓间充质干细胞内可见绿色荧光蛋白的表达,其中105 v.g/cell感染效果最佳,于转染48 h时荧光强度达最高值,感染效率约28%.②骨髓间充质干细胞经G418筛选后检测增强型绿色荧光蛋白阳性细胞率达98%.结论:介导绿色荧光蛋白的腺相关病毒转染骨髓间充质干细胞简便易行,感染复数为105 v.g/cell时效果较佳,目的基因表达稳定,用于后续基因治疗具备一定的可行性.
关键词：重组腺相关病毒绿色荧光蛋白间充质干细胞转染
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：青年人才项目(T200606)湖北省自然科学基金(2005ABA085)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 10034-10037 )
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