用新生大鼠肝细胞体外构建工程化肝组织
张博峰
赵云山
刘巨超
张兰
李荣
徐迎新
1.解放军总医院普通外科研究所,北京市,1008532.解放军总医院普通外科研究所,北京市,1008533.解放军总医院普通外科研究所,北京市,1008534.解放军总医院普通外科研究所,北京市,1008535.解放军总医院普通外科研究所,北京市,1008536.解放军总医院普通外科研究所,北京市,100853
摘要：目的:在供体肝短缺的情况下,构建可植入的工程化肝组织具有重要的临床意义.实验尝试以新生大鼠肝细胞为种子细胞体外构建工程化肝组织,以期进一步的体内植入.方法:实验于2007-04/08在解放军总医院普通外科研究所完成.①实验材料:SPF级、出生24 h以内的雄性SD新生大鼠.②实验过程:采用胰酶消化法获取新生大鼠肝细胞;以2×L-DMEM液(添加地塞米松10 μg/L、表皮生长因子20 μg/L、肝细胞生长因子40 μg/L及胰岛素0.04 U/mL)与液态鼠尾胶原等比例混合;再将肝细胞与胶原凝胶复合构建细胞/凝胶复合物,接种于培养板进行培养.③实验评估:培养后第1,3,5,7,9天,采用相差显微镜观察、四甲基偶氮唑盐比色法、苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色分别对工程化组织的生长情况及组织形态特征进行观察,并对工程化组织的白蛋白合成功能及尿素的代谢水平进行评价.结果:①肝细胞与胶原凝胶复合后,细胞均匀的分布在复合物中.在整个培养过程中,肝细胞保持着稳定的细胞形态.②四甲基偶氮唑盐检测显示肝细胞活性在生长初期平缓下降,直至第5天时仍然保持75%的细胞活性,之后快速下降.③体外培养5 d后,相差显微镜下观察显示肝细胞在胶原凝胶中呈三维立体生长,并保持肝细胞胞体圆形,核大而圆的特异形态;免疫组织化学证实这些肝细胞抗白蛋白抗体染色呈强阳性.④对培养上清中白蛋白和尿素的含量测定表明胶原凝胶中的肝细胞在培养初期保持着稳定的代谢合成功能.结论:用新生大鼠肝细胞及胶原构建出一种有功能的工程化肝组织模型,这种模型可以应用于今后的工程化肝组织研究.
关键词：组织工程胶原凝胶类大鼠肝细胞
分类号：R329.4(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(50573091)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 201-204 )
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