人组织因子基因RNAi载体pENTRTM/U6-TF-shRNA的构建与鉴定
唐雯1
庄思齐2
杨红玲3
熊石龙3
孙学刚4
封志纯5
1.北京八一儿童医院,北京市,100700;中山大学附属第一医院儿科,广东省,广州市,5100802.中山大学附属第一医院儿科,广东省,广州市,5100803.南方医科大学南方医院检验医学中心,广东省,广州市,5105154.南方医科大学中医药学院中医症候实验室,广东省,广州市,5105155.北京八一儿童医院,北京市,100700
摘要：目的:RNAi效应与基因转移有密切关系.拟通过构建组织因子基因RNAi载体,为达到阻止凝血过程的启动打下基础.方法:实验于2006-11/2007-05在南方医科大学中医药学院中医症候实验室完成.利用Invitrogen公司在线软件设计人组织因子基因(NM_001993)干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒感受态扩增,质粒DNA小提、测序.结果:合成的寡核苷酸双链退火处理后,经4%琼脂糖凝胶电泳,紫外观察可见ds oligo和ss oligo清晰可见,双链寡核苷酸与pENTRTM/U6的连接反应,转化到质粒感受态扩增后,提取得到的质粒DNA经过测序结果证实pENTRTM/U6-TF-shRNA为阳性克隆.结论:成功构建出凝血途径的人组织因子基因pENTRTM/U6-TF-shRNA载体,为研究组织因子基因RNAi载体在出凝血疾病中的应用提供了稳定的转染细胞工具.
关键词：组织因子RNAi载体凝血
分类号：R394(医学遗传学)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 258-261 )
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