骨髓中一类新细胞群——神经组织定向干细胞的确立
张志英
任丛莉
张传森
李亮
党瑞山
孔征东
1.解放军第二军医大学解剖教研室,上海市,2004332.解放军第二军医大学解剖教研室,上海市,2004333.解放军第二军医大学解剖教研室,上海市,2004334.解放军第二军医大学解剖教研室,上海市,2004335.解放军第二军医大学解剖教研室,上海市,2004336.解放军第二军医大学解剖教研室,上海市,200433
摘要：背景:骨髓间充质干细胞和造血干细胞具有分化为神经类细胞的潜能已得到共识.另有研究者认为骨髓中除骨髓间充质干细胞和造血干细胞以外,还寄居着CXCR4阳性的组织定向干细胞,包括骨骼肌、心、肝及神经组织定向干细胞.目的:实验拟进一步证实神经组织定向干细胞寄居于骨髓,并寻求确立神经组织定向干细胞分离、培养的新方法.设计:开放性实验.单位:解放军第二军医大学解剖学教研室.材料:所用成年清洁级SD大鼠由解放军第二军医大学动物中心提供.DMEM/F12,B27,N2均购自Invitrogen公司;bFGF源于CytoLab Ltd;EGF源于Invitrogen公司;Nestin、CXCR4,β-Tublin Ⅲ,神经胶质纤维酸性蛋白等一抗为Santa Cruz公司兔抗鼠多克隆抗体;MAP2ab(Clone11-5B),CNPase(Clone AP20)为NeoMarkers公司小鼠抗大鼠单克隆抗体;荧光(FITC,Cy3)标记试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司;免疫组化试剂盒购自Vector Labora-tories公司.NycoPrepTM分离液(1.077A)购自Axis-Shield 公司.方法:实验于2004-01/2006-12在解放军第二军医大学组织工程研究所完成.取SD大鼠双侧股骨及胫骨,冲洗骨髓腔,经NycoPrepTM分离液分离单核细胞层,DMEM/F12(1∶1) 无血清神经干细胞培养液(内含2%B27,1%N2,20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子, 20 μg/L 表皮生长因子,1×105 U/L青霉素, 100 mg/L链霉素),通过先贴壁、后悬浮的方法从骨髓中分离、培养单克隆生长的神经组织定向干细胞.主要观察指标:通过免疫细胞化学法检测神经组织定向干细胞细胞球CXCR4和nestin蛋白,以及细胞球自然分化后神经元以及神经胶质细胞的标志蛋白.结果:①神经组织定向干细胞细胞球表达神经干细胞标志蛋白nestin和组织定向干细胞标志蛋白 CXCR4.②神经组织定向干细胞细胞球在含15%胎牛血清的DMEM培养液中可自然分化,分化细胞呈梭形或多角形,有2～5个细胞突起,免疫荧光检测显示神经元标志蛋白β-tublinIII及MAP2ab,以及神经胶质标志蛋白CNPase和神经胶质纤维酸性蛋白阳性.结论:骨髓中存在神经组织定向干细胞,可自然分化为神经元样细胞及神经胶质样细胞.
关键词：骨髓神经组织定向干细胞细胞培养鉴定细胞移植
分类号：R394.2(医学遗传学)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1577-1580 )
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