大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建
杨丽华1
张学光1
王如兴2
陈永井1
吕海军1
张燕1
李肖蓉2
1.苏州大学医学生物技术研究所江苏省干细胞重点实验室,江苏省苏州市,2150072.无锡市第一人民医院心内科,江苏省无锡市,214002
摘要：目的:实验旨在克隆大鼠成纤维细胞生长因子2CDS区基因全长,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建成纤维细胞生长因子2的真核表达载体.方法:实验于2007-03/06在苏州大学生物技术研究所完成.①实验材料:克隆载体PMD18-T-vector(takara):真核表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学第一附属医院消化科叶建新博士惠赠:大肠杆菌TOP10购自英俊公司:清洁级新生一两天SD大鼠2只.②实验过程及评估:体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞.Trizol法抽提心室肌细胞总mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法反转录获得总的cDNA,聚合酶链反应的方法扩增成纤维细胞生长因子2基因的CDS区片断全长.将扩增出来的基因片断和克隆载体PMD18-T-vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经电泳,质粒聚合酶链反应和酶切等鉴定正确后送去测序确认.测序正确后抽重组质粒,bgl Ⅱ和pst Ⅰ同时双酶切PMD18-T-FGF-2和PIRES2-EGFP,将切下的目的基因片段和线性PIRES2-EGFP空质粒载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,构建其真核表达载体.结果:①成功培养出了形态典型的SD大鼠的心室肌细胞.②所获的大鼠成纤维细胞生长因子2DNA序列与GeneBank中收录的大鼠成纤维细胞生长因子2序列完全一致.③PIRES2-EGFP-bFGF真核表达载体的构建测序表明,成纤维生长因子2成功插入真核表达载体PIRES2-EGFP之中.结论:实验成功克隆了大鼠成纤维细胞生长因子2基因全长,并构建了其真核表达载体.为转基因细胞制备和移植治疗心肌梗死奠定基础.
关键词：成纤维细胞生长因子2心肌/细胞学载体构建大鼠组织构建
分类号：R329.114(人体形态学)
资助基金：实验室开放基金(WK0512)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2875-2878 )
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