外周血来源间充质干细胞的成骨及成脂诱导分化
徐军军1
胡刚2
邹运动1
刘鹏3
李裕强4
金岩5
1.西北农林科技大学动物医学学院,陕西省杨凌区,712100;解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织病理学教研室(解放军第四军医大学组织工程研发中心),陕西省西安市,710032;西安交通大学第二医院皮肤科,陕西省西安市,7100042.解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织病理学教研室(解放军第四军医大学组织工程研发中心),陕西省西安市,710032;西安交通大学第二医院皮肤科,陕西省西安市,710004;解放军第二○一医院口腔科,辽宁省辽阳市3.西安交通大学第二医院皮肤科,陕西省西安市,710004;解放军第二○一医院口腔科,辽宁省辽阳市4.西北农林科技大学动物医学学院,陕西省杨凌区,7121005.西安交通大学第二医院皮肤科,陕西省西安市,710004
摘要：目的:目前对于是否存在外周血来源间充质干细胞备受争议.实验拟进一步探讨在皮肤损伤与非损伤条件下,外周血来源间充质干细胞的分离培养及其成骨、成脂多向分化特性.方法:实验于1996-08/1997-11在解放军第四军医大学组织工程研发中心完成.①动物:清洁级SD大鼠24只,随机数字表法分为正常组、创面组,12只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:创面组大鼠麻醉后,背部切去3 cm×3 cm全层皮肤,建立创伤模型.术后5 d,两组大鼠腹主动脉抽血, 8 mL/只,加入含体积分数为0.1胎牛血清的α-MEM培养基,密度梯度法分离培养外周血来源间充质干细胞.取大鼠双侧股骨、胫骨,全骨髓法分离培养骨髓来源间充质干细胞作为对照.③实验评估:培养至第12天,计数原代培养每1×105个外周血单个核细胞所形成的间充质干细胞克隆数.取第3代外周血间充质干细胞,行CD45、CD34、I型胶原免疫组织化学鉴定细胞表型;按1×104密度接种于12孔板,细胞贴壁后分别换用成骨、成脂诱导液培养,以茜素红、油红染色检测其分化特性.结果:①细胞形态观察:原代培养的外周血来源间充质干细胞呈成纤维样.②克隆形成:外周血来源间充质干细胞形成的克隆数仅为骨髓来源间充质干细胞的1/6～1/8,创面组外周血间充质干细胞形成的克隆数是正常组3～4倍.③细胞表型鉴定:外周血来源间充干细胞CD45、CD34呈阴性,I型胶原呈阳性.④成骨及成脂诱导:外周血间充质干细胞成骨诱导后21 d出现钙沉积,茜素红染色呈阳性;成脂诱导后14 d有少量脂滴出现,油红染色为阳性.结论:①皮肤损伤状态下外周血间充质干细胞克隆数量是正常条件的3～4倍,但仍远低于骨髓来源间充质干细胞的克隆能力.②体外分离培养的外周血间充质干细胞具备成骨、成脂分化特性.
关键词：间充质干细胞外周血创伤分离培养诱导
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家科技重大专项(2002AA205041)国家科技重大专项(2005AA205241)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3057-3060 )
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