体外培养基中加入细胞生长因子诱导大鼠骨髓单个核细胞向内皮细胞的分化
陈文娜1
李大勇2
李曦明1
曲静1
马贤德1
孙宏伟1
1.辽宁中医药大学,辽宁省沈阳市,1100322.辽宁中医药大学附属第一医院,辽宁省沈阳市,110032
摘要：背景:内皮祖细胞在骨髓中的含量高于外周血,但也仅占骨髓单个核细胞的1%.因此,在一般实验室培养过程中也需要解决提高内皮祖细胞体外扩增数量并保持其低分化状态的问题.目的:观察在含胎牛血清的M199培养基中加入血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导内皮祖细胞的定向分化能力.设计、时间及地点:以细胞为观察对象的开放性实验,于2007-09/2008-02在辽宁中医药大学教学实验中心bsl-2级实验室完成.材料:体质量(200±20)g的健康成年Wistar大鼠.方法:无菌采集健康Wistar大鼠股骨骨髓,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞,加入含胎牛血清+肝素+血管内皮细胞牛长因子和碱性成纤维细胞生长因子的M199实验培养液和不含诱导生长因子与肝素的M199培养液为对照组.主要观察指标:诱导骨髓细胞向内皮样细胞生长过程中,应用表面抗原免疫细胞化学染色鉴定细胞,以Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光实验鉴定培养细胞向内皮细胞分化的程度.结果:贴壁细胞培养诱导后具有内皮细胞的形态学特征,细胞呈上皮细胞样铺路石状贴壁生长,贴壁时间相对缓慢.加入M199实验培养液诱导后的第9天Ⅷ因子、CD31阳性表达的细胞分别为(55.1±7.2)%、(45.64±5.8)%, Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率为(78.2±5.4)%,提示为正在分化的内皮祖细胞.对照组相关抗原表达阴性,提示为分化早期的骨髓细胞.结论:结果显示骨體单个核细胞培养出可稳定扩增的内皮祖细胞,在体外特殊诱导环境下定向分化为内皮样细胞,且效果优于对照组.
关键词：骨髓单个核细胞内皮祖细胞分化
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(30600843)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 4065-4068 )
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