构建人热休克蛋白22基因真核表达载体pEGFP-N1/HSP22及在血管内皮细胞中的表达
鲍慧慧
程晓曙
陈琦
洪葵
李萍
王玲
1.南昌大学第二附属医院心内科,南昌大学心血管疾病研究所,江西省南昌市,3300062.南昌大学第二附属医院心内科,南昌大学心血管疾病研究所,江西省南昌市,3300063.南昌大学第二附属医院心内科,南昌大学心血管疾病研究所,江西省南昌市,3300064.南昌大学第二附属医院心内科,南昌大学心血管疾病研究所,江西省南昌市,3300065.南昌大学第二附属医院心内科,南昌大学心血管疾病研究所,江西省南昌市,3300066.南昌大学第二附属医院心内科,南昌大学心血管疾病研究所,江西省南昌市,330006
摘要：背景:已有实验证实,人热休克蛋白22(Heat shock protein22,HSP22)存在于人的多种组织中,但构建其真核表达质粒是否可转染人血管内皮细胞并完整表达.目的:构建pEGFP-N1/HSP22真核表达质粒并观察在内皮细胞中的表达.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/10在南昌大学第二附属医院分子中心完成.材料:pEGFP-N1真核表达质粒及DH5α为南昌大学第二附属医院分子中心保存,MCF-7细胞来源于南昌大学生化实验室馈赠,人脐静脉血管内皮细胞(HUvEC)株购至南京基凯牛物技术公司.方法:采用反转录聚合酶链式反应从人MCF-7细胞中扩增热休克蛋白22基凶,将热休克蛋白22基因连接到真核表达载体pEGFP-N1中,并转化DH5α,获得阳性克降进行双酶切和测序鉴定.用脂质体法将重组质粒转染人脐静脉血管内皮细胞.主要观察指标:荧光显微镜、反转录一聚合酶链反应法及Western blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果:①琼脂糖凝胶电泳检测聚合酶链反应扩增产物,热休克蛋白22基因片段长约613 bp,与预期分子量相符,测序结果证实克隆完全正确:其阳性克隆进行酶切鉴定与热休克蛋白22理论值相符.②反转录-聚合酶链反应法检测转染的人脐静脉血管内皮细胞中有热休克蛋白22mRNA表达;Western blot检测可见一特异性热休克蛋白22蛋白条带存在.结论:成功构建了携带人热休克蛋白22及pEGFP-N1真核表达质粒.并验证已在人脐静脉血管内皮细胞中表达.
关键词：热休克蛋白克隆生物基因表达转染组织构建
分类号：R329(人体形态学)
资助基金：江西省自然科学基金资助(0640089)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 4633-4636 )
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