分离培养方法及冻存技术对犬骨髓间充质干细胞生长和增殖的影响
童培建
何帮剑
金红婷
赵红昌
肖鲁伟
1.浙江中医药大学附属第一医院骨科,浙江省杭州市,3100062.浙江中医药大学附属第一医院骨科,浙江省杭州市,3100063.浙江中医药大学附属第一医院骨科,浙江省杭州市,3100064.浙江中医药大学附属第一医院骨科,浙江省杭州市,3100065.浙江中医药大学附属第一医院骨科,浙江省杭州市,310006
摘要：背景:骨髓间充质干细胞在体外长期培养易发生自发分化,而失去多分化潜能,因此必须对培养的细胞及时冻存,需要时再进行复苏.目的:建立犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养、增殖、冻存的方法. 设计、时间及地点:对照观察细胞学实验,于2005-06/2008-06在浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所完成. 材料:健康成年雄性Beagle犬用于骨髓间充质干细胞的提取.方法:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,并进行传代扩增培养.将第2代骨髓间充质干细胞与12.5% DMSO混匀置于冻存管中,采用慢冻快融法进行冻存和复苏:将冻存管置于-4 ℃冰箱2 h,然后移入-30 ℃冰箱2 h,再置于厚壁塑料泡沫盒中,扎紧密封,置-80 ℃冰箱过夜后,取出冻存管直接放入液氮中保存,或放入-80 ℃冰箱保存.复苏时将冻存管从液氮或- 80 ℃冰箱中取出,立即置37 ℃水浴并轻轻摇动, 1～2 min内迅速解冻.主要观察指标:复苏前后细胞成生长活性及形态变化.结果:分离的骨髓间充质干细胞为以均一的梭形的成纤维细胞样贴壁生长,贴壁及增殖能力强,传代细胞贴壁较快.经过液氮长期冻存后, 将复苏后的骨髓间充质干细胞再培养,细胞形态及生长状态与冻存前无差异,均呈长梭形均匀分布生长,细胞生长增殖旺盛.结论:采用密度梯度离心法结合贴壁培养法可获得犬骨髓间充质干细胞,应用慢冻快融技术进行冻存和复苏,较好的保持了冻存细胞的活力和功能.
关键词：犬骨髓间充质干细胞体外培养生物学特性冻存
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：浙江省中医药管理局重点项目(2005Z003)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 7455-7459 )
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