人胚胎视网膜前体细胞的体外培养条件及分化特性
钟秀风1
彭福华2
葛坚1
黄冰1
李永平1
1.中山大学中山眼科中心,国家眼科学重点实验室,广东省广州市,5100602.中山大学附属第三医院神经科,广东省广州市,510630
摘要：背景:视网膜干细胞已在多种脊椎动物眼内发现,但目前对人类视网膜干细胞或前体细胞的生物学特性尚知之甚少.目的:探讨人胚胎视网膜前体细胞的体外培养条件及分化潜能.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-03/2006-02在中山大学中山眼科中心完成.材料:人胚胎神经视网膜来源于4例流产胎儿.方法:分离胚胎眼球神经视网膜,经胰酶消化法制备单细胞悬液,加入含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、左旋谷氨酰胺的无血清高糖DMEM/F12培养基进行原代及传代培养.收集培养第1～3代的细胞克隆球体,接种到右旋多聚赖氨酸及层粘连蛋白预包被的6孔细胞培养板内,培养7 d后行免疫细胞化学染色.主要观察指标:倒置显微镜下观察视网膜前体细胞分化前后的形态变化,免疫细胞化学法鉴定分化细胞特性.结果:部分人胚胎神经视网膜细胞呈神经球体样悬浮生长,细胞球体边界清楚,折光性强,表达视网膜前体细胞标签巢蛋白;将其接种到分化条件下培养7 d后,细胞体积增大,变扁平,呈梭形、多角形,伸出大小不等的细胞突起,大部分细胞表达视网膜神经元细胞分子标签βⅢtubulin和胶质细胞标签胶质纤维酸性蛋白,少量细胞表达光感受器标签视紫红质.结论:人胚胎视网膜前体细胞可在体外扩增培养,在胎牛血清联合右旋多聚赖氨酸、层粘连蚩白特定诱导条件下,可以向视网膜神经元、胶质细胞及光感受器细胞分化.
关键词：视网膜前体细胞培养诱导分化神经元
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：广东省科技计划(2006B36006007)广东省科技计划(20088030301081)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 10117-10120 )
英文信息