超顺磁性氧化铁标记神经干细胞及对其生物学特性的影响

汪兆艳; 杨印祥; 栾佐

摘要：背景:细胞标记与核磁共振联合,可无创性活体标记移植的神经干细胞存在部位、存在方式及其一些生物学特性.目的:观察超顺磁性氧化铁体外标记人神经干细胞的效果.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-12/2007-06在解放军海军总医院儿科实验室完成.材料:流产人胚胎由解放军海军总医院提供.超顺磁性氧化铁,Lot number97060601,为Advanced magnetics,inc.American 产品.方法:取人胚胎脑海马组织,机械法分离单细胞悬液,加入含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的神经干细胞培养基体外培养.取11.2 g/L.超顺磁性氧化铁,用神经干细胞培养基稀释成28 mg/L.后,加入1.0 mg/L多聚赖氨酸8μL混匀,制成超顺磁性氧化铁一多聚赖氨酸复合物的标记培养基.取增殖活跃的神经干细胞球,机械吹散制成浓度为1×109 L-1的单细胞悬液,加入等体积的含超顺磁性氧化铁的无血清培养液.1周后撤除各种细胞因子,添加体积分数为5%的胎牛血清诱导神经干细胞分化24 h.主要观察指标:普鲁士蓝染色鉴定标记阳性率,免疫荧光染色检测分化细胞胶质纤维酸性蛋白和神经丝的表达. 结果:超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞球颜色微黄,与末标记细胞比较,其克降形成的速度并没有减慢.经超顺磁性氧化铁标记20 h后,神经干细胞胞浆中含有蓝色铁颗粒,阳性率达90%.诱导后超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞胶质纤维酸性蛋白、神经丝均呈阳性表达.结论:在体外超顺磁性氧化铁能够高效标记神经干细胞,且标记后不影响其生物学特性,仍可以正常扩增和定向分化为神经元、星形胶质细胞.