胎鼠纹状体神经干细胞分离培养及鉴定
王学明1
刘秀梅2
衣明纪3
黄勇1
1.烟台毓璜顶医院烧伤整形美容科,山东省烟台市,2640002.烟台毓璜顶医院儿科,山东省烟台市,2640003.青岛大学医学院附属医院儿童保健科,山东省青岛市,266003
摘要：背景:从胎鼠神经系统的多个部位如大脑半球、海马、皮质、脑室区等可分离出神经干细胞.目的:探讨胚胎大鼠大脑纹状体神经干细胞的取材、分离、培养和鉴定方法,观察神经干细胞增殖、传代和分化的规律.设计、时间及地点:观察性实验,于2008-03/08往烟台毓璜顶医院中心实验室完成.材料:选用普通级健康成年Wistar大鼠12只,按雌雄1:1比例于每晚6时合笼,次晨检查出阴道栓子(阴道内皮结晶)为妊娠0 d.方法:在无菌条件下取孕13 d胚胎大鼠脑纹状体组织,用无血清培养技术在体外进行神经干细胞的培养、扩增和传代.分别用抗巢蛋白抗体、抗微管相关蛋白2抗体和抗胶质原纤维酸性蛋白抗体对培养的细胞进行干细胞特性和多分化潜能的免疫组织化学鉴定.主要观察指标:①显微镜下观察细胞生长情况.②神经干细胞分化情况及免疫签定.结果:①原代细胞种植后24 h可见大量分裂期的神经干细胞,呈对称或不对称分裂,细胞核较大,连续观察可见细胞分裂成2个完全独立的神经干细胞;48 h后出现许多由4～10个细胞疏松连接的细胞团;神经干细胞进入快速增殖期5 d后出现许多大小不等的细胞集落,即神经球,神经球呈规则的圆球状,细胞排列紧密,表面光滑没有突起.②培养4～6 h后悬浮的神经干细胞球逐渐贴壁,大部分细胞分化后胞体呈圆形或椭圆形,具有1个或2个长突起,少量细胞具有多个粗长突起.贴壁分化3 d左右,具有1个或2个突起的神经元样细胞逐渐减少,具有多个租长突起的星形胶质细胞样细胞逐渐增多.悬浮的神经干细胞球经巢蛋白染色呈阳性反应,部分细胞呈微管相关蛋白2和胶质原纤维酸性蛋白染色阳性.结论:从胎鼠纹状体中分离培养的神经干细胞具有自我增殖、自我更新能力,并能分化为神经元及神经胶质细胞.
关键词：神经干细胞培养鉴定巢蛋白
分类号：R394.2(医学遗传学)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3640-3644 )
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