人脐血基质细胞的体外培养及向成骨细胞诱导分化
刘霞1
马云胜2
罗美3
秦书俭1
1.辽宁医学院组织学与胚胎学教研室,辽宁省锦州市,121000;辽宁中医药大学解剖学教研室,辽宁省沈阳市,1100002.辽宁医学院组织学与胚胎学教研室,辽宁省锦州市,1210003.辽宁医学院生物化学教研室,辽宁省锦州市,121000
摘要：背景:研究证实婴儿脐带血里含有类似骨髓间充质细胞的细胞,但在培养过程中其成功率很低且难度高.目的:拟在体外分离培养人脐血基质细胞,并观察其分化潜能.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/2008-06在辽宁医学院中心实验室完成.材料:健康足月新生儿脐带血12份,每份30～60 mL,由锦州市妇婴医院提供.方法:取采集的脐带血,使用淋巴细胞分离液离心后取界面上的白色混浊状细胞层,加入含体积分数为10%胎牛血清、20 μ g/L碱性成纤维细胞生长因子、0.3 g/L L-谷胺酰胺、100 U/mL青霉素和100 g/L链霉素的L-DMEM培养液悬浮细胞,按2×10~9L~(-1)密度接种于25cm2培养瓶中,待细胞达70%汇合时消化传代.取处于对数生长期的脐血基质细胞,将其培养基更换为含有地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C、体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养基成骨诱导21～30 d.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态学特征,描绘生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,碱性磷酸酶染色和Von-Kossa染色检测成骨能力.结果:原代培养的人脐血基质细胞呈长梭形,需21～30 d长满瓶底,传代后细胞增殖缓慢并逐渐死亡,细胞平均倍增时间为42 h,处于G_0/G_1期的细胞达(86.54±2.31)%.在成骨诱导培养基里,脐血基质细胞增殖速度减慢,细胞形态无明显变化,成骨诱导14 d后碱性磷酸酶阳性率为(46.0±2.1)%,成骨诱导21 d形成钙化结节.结论:应用体积分数为10%胎牛血清、20 μ g/L碱性成纤维细胞生长因子的L-DMEM培养液可在体外成功分离培养出入脐血基质细胞,但细胞增殖能力有限,诱导后可向成骨细胞方向分化.
关键词：脐血基质细胞体外培养诱导成骨
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：辽宁省教育厅科学研究项目(2008403)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3703-3707 )
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