RNAi特异性抑制A20基因对H2O2诱导人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响
李蕾
高静
陈海英
俞帅
曲鹏
1.大连医科大学附属第二医院心内科,辽宁省大连市,1160272.大连医科大学附属第二医院心内科,辽宁省大连市,1160273.大连医科大学附属第二医院心内科,辽宁省大连市,1160274.大连医科大学附属第二医院心内科,辽宁省大连市,1160275.大连医科大学附属第二医院心内科,辽宁省大连市,116027
摘要：背景:锌指蛋白A20是近年来细胞内源性保护机制研究的新靶点,目前研究表明锌指蛋白A20抑制肿瘤坏死因子,脂多糖等多种炎性细胞因子诱导核因子κB信号通路激活所引起的血管平滑肌细胞增殖,但有关A20抗细胞氧化损伤方面的影响报道甚少.目的:观察锌指蛋白A20基因干扰对H2O2诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞核中核因子κB表达的影响及可能的分子生物学机制.设计、时间及地点:随机对照实验,于2007-03/2008-06在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成.材料:体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞,构建针对Genbank中人A20的基因序列,采用脂质体LipofectamineTM2000介导80pmol siRNA,6 μL转染.方法:将培养的第4代人脐动脉血管平滑肌细胞随机分6组,①空白组:培养基培养,未给与任何干预.②A20siRNA组:转染A20siRNA24 h.③scramble siRNA组:转染阴性对照scramble siRNA 24 h.④H2O2组:H2O2持续刺激6 h.⑤H2O2 +A20siRNA组:转染A20siRNA24h后H2O2持续刺激6h.⑥H2O2+scramble siRNA组:转染阴性对照scramble siRNA 24 h后H2O2持续刺激6 h.主要观察指标:以RT-PCR,Western-blotting检测A20基因表达变化,以四甲基偶氮唑蓝方法测定细胞增殖活性,以流式细胞技术观察血管平滑肌细胞细胞周期的变化,以Western-blotting检测细胞核中核因子κB p65的蛋白含量表达.结果:H2O2组细胞增殖率明显高于空白组,但低于H2O2+A20siRNA组(P＜0.05).H2O2组S期、G2/M期构成百分比,增殖指数均较空白组明显升高,然而较H2O2+A20siRNA组明显降低(P＜0.05),空白组A20mRNA与蛋白有微弱表达,A20siRNA组较空白组表达减少(P＜0.05);H2O2组A20mRNA与蛋白表达明显高于空白组但显著低于H2O2+A20siRNA组(P＜0.05)干扰效率大约55%.细胞核中核因子κB p65有少量表达:A20siRNA干扰后核因子κ B p65含量明显增加;H2O2刺激后核因子κ B p65表达含量显著增加但明显低于H2O2+A20siRNA组(P＜0.05).结论:A20基因可抑制H2O2损伤诱导的血管平滑肌细胞的增殖,其分子机制可能通过其负反馈抑制了核因子κ B介导的信号转导途径.
关键词：H2O2锌指蛋白A20基因干扰血管平滑肌细胞增殖核因子κB
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(30670836)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 4658-4662 )
英文信息