不同冷冻方法对人卵巢组织血管内皮生长因子表达及血管生成的影响
傅锦媚
汪燕
肖准
李尚为
1.四川大学华西第二医院生殖医学中心,四川省成都市,6100412.四川大学华西第二医院生殖医学中心,四川省成都市,6100413.四川大学华西第二医院生殖医学中心,四川省成都市,6100414.四川大学华西第二医院生殖医学中心,四川省成都市,610041
摘要：背景:人卵巢组织冷冻已成为一种保存生育能力的手段,卵巢组织移植后必须经过血管重建过程才能恢复血供,冷冻保存和复苏技术是影响移植后卵巢组织血管重建的关键.目的:比较新型玻璃化冷冻和慢速冷冻后人卵巢组织血管内皮生长因子表达情况及微血管密度,探讨不同冷冻方法对人卵巢组织血管重建的影响.方法:8份卵巢组织标本取自子宫内膜癌患者手术切除的正常卵巢组织,将每份卵巢皮质切成1.5 mm×1.5 mm×1.0 mm大小的组织块共12块后,随机数字表法分为3组:对照组(新鲜组)、新型玻璃化冷冻组和慢速冷冻组.将新型玻璃化冷冻组卵巢组织块依次在含体积分数7.5%乙二醇+体积分数7.5%二甲基亚砜+体积分数20%胎牛血清的TCM-199培养液和含体积分数15%乙二醇+体积分数15%二甲基亚砜+0.5 mol/L蔗糖的TCM-199培养液中平衡脱水,然后直接浸入液氮并装入冷冻管保存,解冻时按浓度梯度1.0,0.5,0.25 mol/L蔗糖和含体积分数20%牛血清的TCM-199培养液依次洗脱冷冻保护剂.将慢速冷冻组人卵巢组织块放入盛有1 mL冷冻液(含1.5 mol/L二甲基亚砜+体积分数20%牛血清+0.1mol/L蔗糖的TCM-199培养液)的1.8 mL冷冻管内平衡,然后放入程序冷冻仪中按设定程序进行冷冻.解冻时按浓度梯度1.0 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.5 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.25 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖和0.1 mol/L蔗糖依次洗脱冷冻保护剂.冻融组及对照组均进行体外培养.免疫组织化学观察培养0,2,4,6 d各组人卵巢组织血管内皮生长因子和CD34表达情况,并进行微血管计数.结果与结论:3组人卵巢组织培养前后间质细胞中均见血管内皮生长因子成斑片状弱表达,培养2 d血管内皮生长因子表达均增加并达到峰值,培养4 d均开始减弱,6 d时进一步减弱;与慢速冷冻组相比,新型玻璃化冷冻组血管内皮生长因子表达更接近对照组.3组人卵巢组织培养2 d微血管密度均增加并达到峰值,对照组和新型玻璃化冷冻组明显高于慢速冷冻组(P<0.05):慢速冷冻组培养4 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05);3组培养6 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05).与慢速冷冻法相比,新型玻璃化冷冻法能更好地保存人卵巢组织间质细胞和细胞外基质,对卵巢组织血管内皮生长因子表达及微血管生成的影响更少.
关键词：人卵巢组织新型玻璃化冷冻慢速冷冻血管内皮生长因子微血管密度
分类号：R392.114(医学免疫学)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 233-236 )
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