人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体的构建及鉴定
郭伟韬
刘思景
王辉
肖启贤
陈子秋
黄云
王斌
1.广东医学院附属医院骨科,广东省湛江市,5240012.广东医学院附属医院骨科,广东省湛江市,5240013.广东医学院附属医院骨科,广东省湛江市,5240014.广东医学院附属医院骨科,广东省湛江市,5240015.广东医学院附属医院骨科,广东省湛江市,5240016.广东医学院附属医院骨科,广东省湛江市,5240017.广东医学院附属医院骨科,广东省湛江市,524001
摘要：背景:内部核糖体进入位点序列载体能将上下游基因共同转录,故通过此载体可使连接在一起的人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2同时高表达,可为骨缺损的治疗提供新方法.目的:实验通过引入内部核糖体进入位点序列,采用基于attLXattR的λ噬茵体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体并进行鉴定.方法:用聚合酶链反应方法扩增人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2目的基因,将两个基因亚克隆至pIRES2-EGFP载体中,构建phBMP2-IRES-hFGF2载体,通过BP反应将hBMP2-IRES-hFGF2重组到载体pDONR221中,再通过LR反应将其转移到腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST中,线性化后转染293细胞进行包装获得重组腺病毒Ad-hBMP2-IRES-hFGF2.结果与结论:phBMP2-IRES-hFGF2经酶切及测序鉴定正确,带hBMP2-IRES-hFGF2的载体在293细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,病毒滴度为2.82×1010 ifu/mL,证实成功构建了带有人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因重组腺病毒载体.
关键词：人骨形态发生蛋白2人成纤维细胞生长因子2腺病毒载体内部核糖体进入位点序列转染基因治疗
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：广东省自然科学基金项目项目(8452402301001081)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 4402-4406 )
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