携RSKA/hIGF-1杂交基因重组质粒的构建及表达
郑水长
高仕长
倪卫东
梁安霖
1.重庆医科大学附属第一医院骨科,重庆市,4000102.重庆医科大学附属第一医院骨科,重庆市,4000103.重庆医科大学附属第一医院骨科,重庆市,4000104.重庆医科大学附属第一医院骨科,重庆市,400010
摘要：背景:骨骼肌肌萎缩的治疗一直是基础和临床研究的难点和热点之一,近年来基因治疗在该领域得到了广泛的研究和关注.目的:拟构建携带大鼠骨骼肌α-肌动蛋白/人胰岛素样生长因子1(rat skeletal α-actin/human insulin-like growth factor-1,RSKA/hlGF-1)杂交基因的重组真核表达质粒,并观察其在C2C12细胞内表达.方法:登录Genbank数据库,查找RSKA启动子序列、hIGF-1 cDNA序列和人生长激素3'尾端非编码区序列(3'UTR),把3段基因序列拼接后进行全基因合成,再将合成的全基因融合到PbluescriptⅡSK(+)[PBS]质粒上.用酶切电泳及测序检查质粒重组后序列的正确性;重组质粒转染C2C12细胞,应用RT-PCR和Western blot法分别鉴定转染细胞中hlGF-1 mRNA和蛋白的表达.结果与结论:重组质粒PBS-RSKA/hIGF-1酶切图谱与预期相同,测序验证插入片段全序列无改变.转染C2C12细胞后,RT-PCR及Western blot结果显示有特异条带出现,且差异明显.结果证明成功构建携RSKA/hlGF-1杂交基因的重组质粒,并在C2C12细胞中正确表达.
关键词：胰岛素样生长因子1α-肌动蛋白生长激素基因重组转染
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：重庆市卫生局科研项目(07-2-088)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 8604-8607 )
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