核转染对成体骨髓源性干细胞的影响
李震
沈晓涛
曹亮
毛颖玉
陈斯韵
郑馨
蔡冬青
1.暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,5106322.暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,5106323.暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,5106324.暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,5106325.暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,5106326.暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,5106327.暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,510632
摘要：背景:成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源.对成体骨髓源性干细胞的示踪,是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键.目的:探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,在细胞表型、增殖能力、心肌分化潜能是否存在的影响.方法:应用核转染技术利用U-23程序将编码maxGFP报告基因的载体对成体骨髓呈克隆样干细胞进行转染,应用MTT法对核转染前后的生长曲线进行测定,使用3 μmol/L 5-氮胞苷对核转染前后成体骨髓呈克隆样干细胞进行向心肌分化诱导,并利用RT-PCR对向心肌分化的特异性标记物GATA4与MLC-2v的表达进行测定.使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支结扎模型,对使用经maxGFP转染的成体骨髓呈克隆样干细胞施心内注射并于注射后的第2天和第7天对经注射心脏行冰冻切片并观察maxGFP在体内的表达情况.结果与结论:经核转染24 h后,第47代及第119代成体骨髓呈克隆样干细胞的转染率为49.4%和43.1%,转染后5 h,开始出现呈绿色荧光阳性的细胞,经核转染后仍能保持小圆球形、可贴壁、呈克隆样生长.MTT检测结果显示:核转染前后第47代及第119代均具有相似的生长曲线.核转染前第47代及119代细胞平均群体倍增时间分别为8.57,10.28 h;核转染后分别为9.42,10.42 h,各代前后比较差异无显著性意义(P=0.551,P=0.774).RT-PCR检测结果显示:核转染前5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强;核转染后5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强,上述2个向心肌分化指标于转染前后变化并不明显.体内实验结果:心内注射经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,第2天及第7天可在经注射心肌中发现有少量绿色荧光阳性的细胞.提示,核转染可快速地将外源基因导入细胞,经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞仍能保持其细胞形态、增殖能力及向心肌分化潜能,然而,经maxGFP基因核转染的成体骨髓呈克隆样干细胞,移植入心肌后只有少数细胞能表达经转染基因.
关键词：成体骨髓呈克隆样干细胞核转染增殖分化示踪
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(863;2007AA02Z105)国家自然科学基金(30973158)国家自然科学基金(30770886)国家自然科学基金(BDNF-TrkB;30570369)国家自然科学基金(30340038)广东省自然科学基金重点项目(04105826)广东省科技攻关计划(2004B30601007)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
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