pcDNA3/BDNF真核表达载体的构建
孟步亮1
徐丹2
刘佳2
李力燕2
王廷华2
1.昆明医学院解剖学教研室,云南省昆明市,6500312.昆明医学院神经科学研究所,云南省昆明市,650031
摘要：背景:脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作用广泛,但属于生物大分子,不能通过血脑屏障.基因治疗是目前解决脑源性神经营养因子给药途径最有希望的方案.目的:拟构建大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体.方法:采用反转录聚合酶链式反应技术从SD 大鼠脑组织提取总RNA,扩增脑源性神经营养因子基因cDNA 序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3 中,分别取10 g 质粒pcDNA3 和纯化的目的基因分别进行EcoR Ⅰ、xho Ⅰ双酶切.将目的基因片段和pcDNA3 载体连接,转入感受态DH5α细胞中,经酶切鉴定后送上海博亚生物技术有限公司测序.结果与结论:RT-PCR 产物为749 bp 的特异片段,重组质粒pcDNA3/BDNF 酶切后产生749 bp 和5 446 bp 的片段,DNA测序证实749 bp 片段的碱基序列与大鼠脑源性神经营养因子基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/BDNF 重组质粒.
关键词：脑源性神经营养因子真核表达载体重组质粒克隆基因表达
分类号：R318(医用一般科学)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 241-244 )
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