实时荧光定量RT-PCR法建立版纳微型猪近交系中厚皮创面转化生长因子表达体系
李颖1
霍金龙2
潘伟荣2
曾养志2
王继华1
1.昆明医学院第二附属医院整形外科,云南省昆明市,6501012.云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,云南省昆明市,650201
摘要：背景:版纳微型猪近交系能较好的模拟人取皮区创面,构建动物模型,检测与创面愈合及瘢痕形成密切相关的转化生长因子的表达.目的:观察创面愈合过程中转化生长因子β1基因的表达情况.方法:利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪构建了皮肤创面愈合动物模型,通过提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,对与创面愈合相关密切的转化生长因子β1基因进行了RT-PCR扩增.纯化目的片段并与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR.结果与结论:建立的转化生长因子β1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法特异性较好,检测灵敏度可达103 拷贝/μL,线性范围达103～109拷贝/μL,阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系(R2=0.988),扩增效率高(E=107.433%).利用该检测体系检测了45份样品,效果良好,该方法可为研究TGF-β1基因在创面愈合过程中的作用机理奠定分子生物学基础.
关键词：版纳微型猪近交系实时荧光定量转化生长因子基因克隆质粒标准品基因表达
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：创新基金(VEGF、TGF-β1;bcl-2/bax;2009S030)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1186-1190 )
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