反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化
吕志强
吴毅梅
江山平
张蔚
黄林洁
1.中山大学附属第二医院呼吸内科,广东省广州市,5101202.中山大学附属第二医院呼吸内科,广东省广州市,5101203.中山大学附属第二医院呼吸内科,广东省广州市,5101204.中山大学附属第二医院呼吸内科,广东省广州市,5101205.中山大学附属第二医院呼吸内科,广东省广州市,510120
摘要：背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用.瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道.目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响.方法:实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3) 采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率.筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果.检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变.结果与结论:转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P < 0.05).pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P < 0.05).结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化.
关键词：反转录病毒RNA干扰RBL-2H3细胞瞬时感受器电位M7通道心脏组织工程
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(81070027)广东省自然基金项目(10151008901000078)广东省科技计划(2009B030801093)广东省医学科研基金(B2009071)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1199-1204 )
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