Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用
刘强1
郑瑾2
赵星成3
尹郸丹1
陈任安1
刘利1
郝淼旺1
梁英民1
1.解放军第四军医大学唐都医院,血液内科,陕西省西安市,7100382.解放军第四军医大学唐都医院,中医科暨中西医结合肿瘤科,陕西省西安市,7100383.解放军第四军医大学医学遗传与发育生物学教研室,陕西省西安市,710032
摘要：背景:Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力.目的:构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用.方法:克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体.转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用.结果与结论:成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白.Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础.
关键词：Flt3配体CD34+hFLextTrx-hFLext载体
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2006AA02A111)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3476-3480 )
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