蛔虫过敏原ABA-1融合基因在大肠杆菌中的表达及鉴定
于超生1
文忠1
邹泽红2
陈惠芳2
陶爱林2
1.南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉-头颈外科,广东省广州市,5102822.广州医学院第二附属医院过敏反应与临床免疫重点实验室,呼吸疾病国家重点实验室,广东省广州市510260
摘要：背景:利用蛔虫基因融合技术,可将过敏原ABA-1的主要基因进行融合.目的:利用大肠杆菌表达系统重组表达蛔虫主要过敏原ABA-1融合蛋白.方法:从Gene Bank和Protein Database中获取蛔虫主要过敏原ABA-1基因和蛋白序列,选定其中的ABA-1B1,ABA-1A2与ABA-1A1基因重组为融合基因BAA,经密码子优化后,全基因合成目的基因BAA并构建于表达载体PET-44a上,经KCM法转化入大肠杆菌JM109中进行克隆,PET-44a/BAA经NdeⅠ和PstⅠ双酶切及DNA测序正确后,转化入大肠杆菌RosettaBlueTM中,经IPTG诱导表达.表达蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,通过Western blot和氨基酸测序鉴定目的蛋白.结果与结论:大肠杆菌的融合蛋白BAA表达量约占总蛋白的40%,纯化后蛋其白纯度可达90%左右.Western Blot结果显示在相对分子质量45 000处可见一特异目的条带,氨基酸测序显示N端15个氨基酸与目的蛋白完全相同.结果证实,融合蛋白BAA在大肠杆菌中得到高效的表达.
关键词：蛔虫过敏原ABA-1密码子优化组织构建
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家科技重大专项(2008ZX08011-005)重点课题(2009ZX08011-004B)国家自然科学基金(30771240)广州市教育系统科研创新学术团队(B94118)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3679-3682 )
英文信息