沉默Toll样受体4基因表达的RNAi慢病毒载体的构建
阮静1
王旭1
李煜生1
刘爱华2
姜勇1
1.南方医科大学病理生理学教研室,广东省广州市,5105152.南方医科大学附属南方医院呼吸科,广东省广州市,510515
摘要：背景:Toll样受体4 (toll-like receptor4,TLR4)是介导内毒素/脂多糖应答的主要受体,在由内毒素诱导的炎性反应的信号通路中发挥着重要作用.目的:构建人TLR4基因的RNA干扰慢病毒载体,并观察其对人脐静脉内皮细胞TLR4在蛋白水平的沉默效应.方法:利用Invitrogen在线软件设计人TLR4基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核苷酸后克隆到线性载体pENTRTM/H1/TO的黏性末端,并进行DNA测序.得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组反应,从而获得干扰TLR4基因真核表达的慢病毒载体.在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助复合体和TLR4基因的真核表达慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染人脐静脉内皮细胞,检验其干扰TLR4基因表达的有效性.结果与结论:实验成功构建TLR4基因真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8.7×106 U/mL.免疫印迹杂交结果表明,所获得的慢病毒感染人脐静脉内皮细胞TLR4基因在蛋白水平的表达显著降低.实验成功构建了人TLR4基因慢病毒RNA干扰表达载体,并验证了其在人脐静脉内皮细胞上的有效性.
关键词：Toll样受体4RNA干扰慢病毒炎症组织构建
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(81030055)国家自然科学基金(U0632004)长江学者和创新团队发展计划(IRT0731)国家重点基础研究发展计划（973计划）(2010CB529704)高等学校博士学科点专项科研基金(20069981001)广州市科技计划(2007J1-C0301)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3693-3696 )
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