携带双报告基因真核表达载体pHSV1-TK-IRES2-EGFP在小鼠骨髓间充质干细胞内的表达
吴立川1
杨昆1
刘永哲1
陈鹏1
徐文贵2
1.天津医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室,天津市,3000702.天津医科大学附属肿瘤医院,天津市,300060
摘要：背景:单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(herpes simplex virus 1-thymidine kinase,HSV1-TK)与绿色荧光蛋白(EGFP)双报告基因共表达载体构建及其在骨髓间充质干细胞内的表达研究报道较少.目的:构建pHSV1-TK-IRES2-EGFP真核表达载体,并检测其在体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞内的表达.方法:应用聚合酶链式反应从质粒pHSV106中扩增出HSV1-TK基因后与pMD18-T载体连接,构成重组质粒pHSV1-TK/18T.重组质粒以限制性内切酶Bgl Ⅱ和Sal Ⅰ进行双酶切,将其插入同样双酶切处理的pIRES2-EGFP载体内;并将新构成的重组质粒pHSV1-TK-IRES2-EGFP以脂质体法转染小鼠骨髓间充质干细胞.结果与结论:酶切鉴定结果表明,扩增的HSV1-TK基因序列正确,大小为1 130 bp;重组质粒载体内的HSV1-TK序列与Gene Bank报告的序列完全一致;骨髓间充质干细胞转染后在荧光显微镜下可以观察到有特异性绿色荧光出现,HSV1-TK的mRNA有表达.实验成功构建了pHSV1-TK-IRES2-EGFP真核表达载体,在体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞内能有效的表达.
关键词：单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶骨髓间充质干细胞构建阳离子脂质体增强型绿色荧光蛋白基因表达
分类号：R394.2(医学遗传学)
资助基金：天津市自然科学基金重点项目(PET/CT;08JCZDJC23700)天津市教委科研基金项目(20080133)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 11-16 )
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