Gateway非放射标记法构建小鼠破骨细胞前体细胞cDNA文库
张玉平
王顺清
王彩霞
许艳丽
谢健晋
毛平
1.广州市第一人民医院血液科,广东省广州市,5101802.广州市第一人民医院血液科,广东省广州市,5101803.广州市第一人民医院血液科,广东省广州市,5101804.广州市第一人民医院血液科,广东省广州市,5101805.广州市第一人民医院血液科,广东省广州市,5101806.广州市第一人民医院血液科,广东省广州市,510180
摘要：背景:作者前期研究发现一个在破骨细胞形成中起关键作用的基因,其在细胞之间相互识别及膜融合中发挥关键作用.目的:采用Gateway的非放射标记技术构建小鼠破骨细胞早期形成细胞的cDNA基因文库,并检测文库质量.方法:采集C57BL/6小鼠长骨骨髓,收集贴壁的骨髓单核细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子和RANKL诱导形成破骨细胞,在巨噬细胞开始融合至形成破骨细胞的不同阶段开始收集细胞,提取总RNA,用CloneMiner TM cDNA文库构建试剂盒,采用非放射标记方法构建小鼠破骨细胞全长cDNA文库.结果与结论:构建的小鼠骨髓巨噬细胞cDNA文库滴度为2.15×107 CFU/ mL,库容量为10.5×107 CFU,重组率为100%,重组子插入cDNA平均片段大小约为1.7 kb,范围为0.1~5.8 kb.表明非放射标记法构建同样可以构建小鼠骨髓巨噬细胞全长cDNA质粒文库,避免了放射性物质的接触,且文库质量良好.
关键词：小鼠破骨细胞cDNA质粒文库构建鉴定
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：广州市医药卫生科技重点项目(201102A212025)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 215-219 )
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