胶原酶二步消化法分离培养牛角膜基质成纤维细胞
刘曼丽1
邹文进1
黄明汉2
曾静1
1.广西医科大学第一附属医院眼科,广西壮族自治区南宁市,25300212.南宁市爱尔眼科医院,广西壮族自治区南宁市,530000
摘要：背景:获得纯度高、活性强、生物学特性更接近体内状态的角膜基质成纤维细胞是角膜损伤后修复研究的基础.目的:探索体外培养牛角膜基质成纤维细胞的新方法.方法:用Ⅰ型胶原酶对牛角膜基质层进行二步消化分离后制成细胞悬液转入培养瓶中培养,取生长良好的细胞进行传代培养.采用锥虫蓝染色检测消化分离后细胞即刻存活率;倒置相差显微镜动态观察细胞的生长状态;波形蛋白免疫组织化学染色鉴定角膜成纤维细胞;MTT 法检测细胞增殖情况;取处于对数生长期的细胞,绘制细胞生长曲线并计算细胞群倍增时间.结果与结论:在体外成功分离培养牛角膜基质成纤维细胞,显微镜下观察及波形蛋白免疫组织化学染色后证实所培养的细胞为角膜基质成纤维细胞.锥虫蓝染色,细胞即刻成活率达93.5%.细胞生长曲线近似"S"形,其群体倍增时间为38.70 h.说明二步消化法细胞培养技术简便、经济、高效,为原代培养角膜基质成纤维细胞提供了有效渠道.
关键词：角膜成纤维细胞细胞原代培养细胞形态生物学特性消化法
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：广西自然科学基金(0728131)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1201-1205 )
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