兔膜联蛋白A1基因短发夹RNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定
梁博伟1
潘新元2
赵劲民1
殷国前2
胡峰1
1.广西医科大学第一附属医院创伤手外科,广西壮族自治区,南宁市,5300212.广西医科大学第一附属医院整形外科,广西壮族自治区,南宁市,530021
摘要：背景:膜联蛋白A1 参与细胞凋亡的调控.目的:针对兔膜联蛋白A1 基因构建短发夹RNA 慢病毒载体,并检测其对成骨细胞的沉默效率.方法:针对兔膜联蛋白A1 基因设计RNA 干扰靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与BamHI 和EcoRI 双酶切后的pGLV/H1/GFP 载体连接成pGLV-shANXA1,PCR 筛选阳性克隆,测序鉴定.pGLV-shANXA1 和pGLV/helper-1、pGLV/helper-2、pGLV/helper-3 共转染293FT 细胞包装产生慢病毒颗粒LV-shANXA1,并测定其滴度,随后将LV-shANXA1感染兔成骨细胞.结果与结论:经PCR 和测序证实构建片段大小及DNA 序列与目标序列一致,shANXA1 片段完全正确插入慢病毒载体pGLV/H1/GFP 中.包装浓缩慢病毒颗粒LV-shANXA1 的滴度为3.8×108 TU/L.经嘌呤霉素筛选后,感染复数为50 时,LV-shANXA1 对成骨细胞感染效率为80%;感染复数为100 时,感染效率为95%.Real-time PCR 和Western blot 检测显示,LV-shANXA1-901 对膜联蛋白A1 基因的沉默效率最高,在感染复数为50 时,沉默效率可达71.2%.表明实验成功构建的兔膜联蛋白A1 基因短发夹RNA 慢病毒载体能够在细胞水平有效沉默靶基因.
关键词：膜联蛋白A1短发夹RNA慢病毒载体RNA干扰成骨细胞
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(30860285)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1954-1958 )
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