CHOP基因shRNA载体构建及沉默效应
游言文1
徐玉英1
张钦宪2
1.河南中医学院人体解剖与组织胚胎学科,河南省,郑州市,4500082.郑州大学组织胚胎学教研室,河南省,郑州市,450008
摘要：背景:研究认为,CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)通路是内质网应激介导细胞凋亡的3 条通路之一,目前国内外对内质网应激介导细胞凋亡在胃癌方面的研究较少.目的:构建针对人CHOP 基因的短发卡RNA 表达载体,观察RNA 干扰对人胃癌细胞系BGC823 细胞CHOP 基因表达的抑制作用.方法:设计CHOP 的shRNA 靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入真核表达载体pSUPER-EGFP1,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人胃癌细胞系BGC823 细胞,采用RT-PCR 和Western blotting 分别检测CHOP 基因mRNA 和蛋白表达的变化.结果与结论:把针对CHOP 基因的shRNA 的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPER-EGFP1 载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR 和Western blot 检测显示,CHOP 基因的表达水平明显降低,其中以CHOP-1 为靶序列的shRNA 沉默作用最强,CHOP 的表达抑制率约67%.
关键词：短发卡RNAERSCHOP细胞凋亡胃癌
分类号：R318(医用一般科学)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1981-1984 )
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