一种简易的人原代肝细胞分离培养方法
吴青松1
李治国1
刘广波1
高毅2
1.南方医科大学珠江医院肝胆外科,广东省广州市,5102822.南方医科大学珠江医院肝胆外科,广东省广州市,510282;南方医科大学再生医学研究所,广东省广州市,510282
摘要：背景:采用原位两步灌流法分离肝细胞数量多,活性高,但灌流装置价格昂贵,操作环节多,技术要求高,所需时间长,易污染,限制了在一般实验室及人原代肝细胞在医学中的应用.目的:建立人原代肝细胞体外分离培养方法.方法:采用多点穿刺灌注方法将预温38 ℃的前灌流液及Ⅱ型胶原酶溶液灌依次灌入人肝脏组织中,经消化及离心后获得人原代肝细胞;倒置显微镜和电镜观察细胞形态特征,并鉴定.结果与结论:经多点穿刺灌注法消化分离后可获得约5×105个肝细胞,分离获得的肝细胞活率达90%;细胞培养24 h后呈铺路石样生长;电镜示肝细胞呈典型形态特征:细胞核大,胞质少;培养的肝细胞 PAS糖原染色阳性,白蛋白表达阳性.说明多点穿刺灌注法分离人原代肝细胞简单易行,肝细胞产量高、活力好、纯度高,分离培养的肝细胞具有特异性生物学功能表达,适宜在一般条件实验室推广应用.
关键词：原代肝细胞分离培养Ⅱ型胶原酶灌注法
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2006AA02A141)广东省科技计划(2007A032100005)广东省自然科学基金(07300180)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3301-3304 )
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