真核过表达载体共转染3个胰岛发育关键基因在小鼠胎肝细胞内的表达
于静雯
张振
徐艳花
陈容平
杨锐
陈宏
1.南方医科大学附属珠江医院内分泌科,广东省广州市,5102822.南方医科大学附属珠江医院内分泌科,广东省广州市,5102823.南方医科大学附属珠江医院内分泌科,广东省广州市,5102824.南方医科大学附属珠江医院内分泌科,广东省广州市,5102825.南方医科大学附属珠江医院内分泌科,广东省广州市,5102826.南方医科大学附属珠江医院内分泌科,广东省广州市,510282
摘要：背景:大量文献表明,向肝脏细胞引入一个多个胰岛发育的关键因子(如Pdx1、MafA及Ngn3)可以使肝细胞向胰岛细胞的方向进行转化.目的:构建以pcDNA3.1(+)为骨架的质粒载体并共同转染胰十二指肠同源框蛋白(Pdx1)、神经源素3(Ngn3)及V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)至小鼠胎肝细胞并检测其表达情况.方法:以基因组或小鼠胰腺cDNA为模板扩增Pdx1、MafA及Ngn3三个目的基因,应用分子生物学技术,将3个目的片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建小鼠系列真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF通过Lipofectamine2000介导的脂质体转染小鼠胎肝细胞系BNL CL.2,用反转录PCR以及间接免疫荧光法检测3个目的基因的表达情况.结果与结论:目的基因克隆正确,反转录PCR,间接免疫荧光法证实了脂质体转染后小鼠胎肝细胞中有Pdx1、Ngn3以及MafA的表达.结果表明,真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF可成功构建,并能够将Pdx1、Ngn3以及MafA三个基因转至小鼠胎肝细胞进行表达.
关键词：胰十二指肠同源框蛋白神经源素3V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A脂质体转染BNLCL.2细胞株胰岛细胞基因表达
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：广东省自然科学基金(10151051501000095)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3310-3313 )
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