骨髓间充质干细胞中大鼠白细胞介素10复制缺陷型重组腺病毒的表达
李爽1
毕良宽2
朱斌3
唐冰3
朱家源3
1.南方医科大学附属第三医院普通外科,广东省广州市,5106302.中山大学附属第二医院泌尿外科,广东省广州市,5101203.中山大学附属第一医院烧伤外科,广东省广州市,510080
摘要：背景:研究显示,白细胞介素10在脓毒症等炎性疾病发挥了抑制炎症反应、促进疾病转归的重要作用.目的:构建大鼠白细胞介素10重组腺病毒,并以骨髓间充质干细胞为基因载体,观察外源基因在细胞中的表达情况.方法:采用反转录-聚合酶链反应方法从SD大鼠新鲜脾脏组织中提取出的总RNA中克隆大鼠白细胞介素10基因,通过AdEasy系统成功包装、扩增并纯化出含目的基因的重组腺病毒颗粒.取大鼠骨髓细胞,利用密度梯度离心法和贴壁法分离并扩增骨髓间充质干细胞,并使用流式细胞仪进行表型鉴定.以不同感染倍数的Ad.rIL-10/Ad.GFP感染骨髓间充质干细胞,在荧光显微镜下观察感染效率,并用反转录-聚合酶链反应和Weatern blot方法检测目的基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.结果与结论:成功构建了重组腺病毒Ad.rIL-10,计算病毒滴度为6.0×1010 pfu/mL.重组腺病毒Ad.rIL-10对骨髓间充质干细胞有较高的转染效率,当感染复数=200时为70%.提示含外源基因大鼠白细胞介素10的骨髓间充质干细胞持续高效地表达目的基因,是基因治疗的良好细胞载体.
关键词：白细胞介素10腺病毒载体骨髓间充质干细胞目的基因脓毒症
分类号：R394.2(医学遗传学)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 5028-5033 )
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