RNA干扰对成肌细胞系L6中FOXO3a基因表达的影响*
丁洁1
梁炳生2
达志峰2
朱志祥2
韦建2
贾英伟2
冯勇3
1.山西医科大学,山西省太原市,0300012.山西医科大学第二医院骨科,山西省太原市,0300013.上海市第六人民医院骨科,上海市,200030
摘要： 背景：最近的研究发现，一些因子在失神经骨骼肌萎缩的过程中发挥关键性作用，其中“feak-headbox”(Foxo)转录因子是调控骨骼肌萎缩最关键的分子。<br> 目的：探讨RNA干扰技术体外抑制FOXO3a基因表达的效果。<br> 方法：6孔细胞培养板中培养大鼠成肌细胞系 L6，使用 pEGFP-N1与 siRNA 重组质粒等比例在Lipofectamine2000介导下转染，优化与检测系统的转染效率；将2μg FOXO3a基因siRNA重组质粒转染L6，转染48 h与72 h。<br> 结果与结论：①pEG FP-N1与siRNA重组质粒转染后48 h，荧光显微镜下可见细胞中有大量明亮的绿色荧光表达，显示系统有较高的转染效率。②实时定量PCR分析结果显示，转染后48 h和72 h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a mRNA的抑制率与未转染对照组相比差异均有显著性意义(P <0.05)，转染72 h与48 h相比，抑制效应更为明显，并以FOXO3a-Ⅰ的抑制效果最为明显。③Western印迹灰度分析结果显示，转染后48 h和72 h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a蛋白表达的抑制率与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)，转染72 h与48 h相比，抑制效应更为明显，与mRNA水平的影响一致。结果可见RNA干扰技术在体外能够明显抑制叉头蛋白转录因子FOXO3a基因的表达，FOXO3a基因siRNA重组质粒转染其干扰序列对FOXO3a的mRNA和蛋白抑制效果尚不明确，这可为RNA干扰介导的失神经骨骼肌萎缩基因治疗提供一种新的思路。
关键词：组织构建组织构建细胞学实验肌萎缩FOXO3aL6失神经RNA干扰基因表达国家自然科学基金
分类号：R318(医用一般科学)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 5974-5980 )
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