聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒的制备及介导体外转染关节软骨细胞
卢华定
戴驭虎
连礼熠
吕璐璐
赵慧清
1.中山大学附属第三医院骨科,广东省广州市,5106302.中山大学附属第三医院骨科,广东省广州市,5106303.中山大学附属第三医院骨科,广东省广州市,5106304.中山大学附属第三医院骨科,广东省广州市,5106305.中山大学附属第三医院骨科,广东省广州市,510630
摘要：背景：壳聚糖对软骨细胞具有良好的生物相容性和可降解性，但存在基因转染效率偏低的缺陷。目的：构建负载增强型绿色荧光蛋白基因的聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA 纳米粒，检测其理化性能，以及体外对关节软骨细胞的基因转染效率。方法：将聚乙烯亚胺共价连接于壳聚糖骨架上构建聚乙烯亚胺-壳聚糖复合物，再将聚乙烯亚胺-壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白基因的质粒 DNA 以复凝聚法制成纳米粒，以扫描电镜检测纳米粒形态，Zeta 电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位；凝胶电泳阻滞实验观察聚乙烯亚胺-壳聚糖和质粒DNA的结合力。以聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒、裸质粒DNA、脂质体2000及壳聚糖/DNA纳米粒转染体外培养的兔关节软骨细胞，流式细胞仪及荧光显微镜检测基因转染率；激光共聚焦显微镜检测DNA的入核情况。结果与结论：聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA 纳米粒多呈球形，粒径为(154.6±18.6) nm，表面 Zeta 电位为(24.68±6.82) mV，可有效保护质粒DNA免受 DNaseⅠ的降解。体外转染实验证明聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒能介导增强型绿色荧光蛋白基因转染关节软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白，转染率达(23.80±1.74)%，转染率高于裸质粒DNA组及壳聚糖/DNA纳米粒组(P<0.05)，与脂质体2000组无显著差别(P=0.522)。表明聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒能有效保护质粒DNA免受核酸酶降解，对关节软骨细胞有良好的基因转染能力。
关键词：生物材料组织工程软骨材料壳聚糖聚乙烯亚胺非病毒基因载体软骨细胞基因转染DNA纳米粒国家自然科学基金
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金资助项目(82172040，30600632)广东省科技计划基金资助项目(2012B031800451)广东省自然科学基金资助项目(S2011010004808)the National Natural Science Foundation of China, (No.82172040,30600632)the Science and Technology Project of Guangdong Province, (No.2012B031800451)the Natural Science Foundation of Guangdong Province, (No. S2011010004808)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 8162-8168 )
英文信息