慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染的人脐静脉内皮细胞
丁强1
杨波2
王簕3
尹飚2
唐龙2
章波2
1.广州医科大学附属第三医院骨外一区2.广州医科大学附属第三医院骨科,广东省广州市,5101503.广州医科大学荔湾医院,广东省广州市,510150
摘要：背景：人脐静脉内皮细胞转染慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白方便后期示踪该细胞，掌握转染的最佳感染复数(MOI)和产生较强荧光强度的时间，可为后期观察人脐静脉内皮细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。<br> 目的：观察慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白在人脐静脉内皮细胞中的表达，找到稳定标记人脐静脉内皮细胞的方法。<br> 方法：采用胶原酶灌注消化分离人脐静脉内皮细胞，将其置于含有体积分数20%胎牛血清、内皮细胞生长因子的培养基内培养，倒置显微镜观察内皮细胞生长情况，消化离心重悬后进行计数，平均分成4组，每组细胞数5.0×105个，接种于24孔培养皿，空白组加入10μL的DMEM无血清培养基，剩余3组加入慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白进行转染，MOI分别为2，3，4，每组3个皿。<br> 结果与结论：分离的人脐静脉内皮细胞在体外培养5-7d可长成单层，光镜下胞体为单层鹅卵石状排列，第Ⅷ因子相关抗原的检测为阳性。转染后24 h可见绿色荧光，72 h荧光达到最强，细胞转染率与MOI值呈线性增长关系，至21 d 时仍可见绿色荧光。转染后0，7，14，21 d，MOI=3组的人脐静脉内皮细胞数量均与空白组差异无显著性意义，表明转染后细胞增殖能力不受慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白影响。提示慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染人脐静脉内皮细胞效率高，绿色荧光蛋白基因可持续表达21 d，且标记后不影响人脐静脉内皮细胞的增殖活性。
关键词：组织构建血管内皮细胞慢病毒增强型绿色荧光蛋白人脐静脉内皮细胞国家自然科学基金
分类号：R318(医用一般科学)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2351-2356 )
英文信息