血小板源性生长因子B基因转染抑制缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡
陈邦党1
陈小翠1
马依彤2
杨毅宁2
马翔3
刘芬1
1.新疆医科大学第一附属医院及临床医学研究院，新疆心血管病研究重点实验室，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 8300542.新疆医科大学第一附属医院及临床医学研究院，新疆心血管病研究重点实验室，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054; 新疆医科大学第一附属医院心脏中心，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 8300543.新疆医科大学第一附属医院心脏中心,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054
摘要：背景：血小板源性生长因子B(platelet-derived growth factor-B，PDGF-B)是一种有效的促血管生长因子，9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype，rAAV9)对心肌细胞具有良好的靶向亲和力，是目前缺血性心脏疾病基因治疗的理想载体。<br> 目的：探索rAAV9介导PDGF-B基因(rAAV9-PDGF-B)体外转染乳鼠心肌细胞，抵抗缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用。<br> 方法：分离培养原代乳鼠心肌细胞，分别将感染复数为1×105，1×106及1×107 MOI携带rAAV9-PDGF-B基因的重组9型腺相关病毒及空病毒(rAAV9-eGFP)转染乳鼠心肌细胞，逐日在荧光显微镜下观察eGFP的阳性表达，采用流式细胞仪测定rAAV9载体的转染效率，Western blot和免疫荧光鉴定PDGF-B蛋白表达情况；并于rAAV9-eGFP及rAAV9-PDGF-B(107感染复数)转染第5天时，建立体外心肌细胞缺血缺氧损伤模型，通过 TUNEL法检测心肌细胞凋亡数目，Western Blot 检测 Bax及 Caspase-3凋亡相关蛋白的表达，研究PDGF-B基因过表达抗心肌细胞凋亡的作用及可能机制。<br> 结果与结论：rAAV9载体可有效转染乳鼠心肌细胞，eGFP和PDGF-B蛋白可在心肌细胞中高效正确表达，其表达强度随着转染时间和转染复数的增加而逐渐增强，第5天趋于稳定，此时各组转染率相比差异均有显著性意义(P<0.01)。rAAV9-PDGF-B组心肌细胞凋亡率低于rAAV9-eGFP组(P<0.05)，且rAAV9-PDGF-B组凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3的表达与rAAV9-eGFP组比均显著下调(P <0.05)。结果表明，PDGF-B基因过表达可有效减轻缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡，其机制通过抑制Bax和Caspase-3蛋白表达而发挥作用，为rAAV9-PDGF-B载体用于缺血性心脏疾病的基因治疗提供依据。
关键词：组织构建组织工程血小板源性生长因子B9型腺相关病毒基因转染心肌细胞缺血缺氧细胞凋亡转染效率血管新生BAXCaspase-3国家自然科学基金
分类号：R318(医用一般科学)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 6090-6098 )
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