转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞转分化：Notch1受体阻断剂的影响

曾虹; 周懿; 姚国媛

摘要：背景：研究发现，在病理状态下各种细胞可通过转化生长因子β1的介导，促进肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化为肌成纤维细胞，进而加速肾小管间质纤维化的进展。<br>　　目的：验证Notch1受体特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能否有效阻断、部分逆转或者完全逆转转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化。<br>　　方法：以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞为观察对象，建立转化生长因子β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化体外模型，实验分为空白对照组、10μg/L转化生长因子β1组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)部分延迟加入组、转化生长因子β1(10μg/L)+γ-分泌酶抑制剂DAPT(5μmol/L)延迟加入组。分别于12，24，48，72 h，在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；用免疫组织化学法和RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白、E-钙粘连素蛋白和mRNA表达变化。<br>　　结果与结论：①在干预后在12，24，48，72 h，与空白对照组相比较，转化生长因子β1组α-平滑肌肌动蛋白蛋白和mRNA表达均明显增加(P <0.05), E-钙粘连素蛋白和mRNA表达逐渐减少(P <0.05)。②转化生长因子β1+γ-分泌酶抑制剂DAPT组α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mRNA、E-钙粘连素蛋白和mRNA的表达各时间段均接近空白对照组(P >0.05)。③γ-分泌酶抑制剂DAPT部分延迟加入组，α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mRNA的表达在12 h增加(P <0.05)，之后其表达逐渐减少(P <0.05)，E-钙粘连素蛋白表达在24 h开始减少(P <0.05)，之后逐渐增加，E-钙粘连素mRNA各时间段都与空白对照组相接近，72 h时α-平滑肌肌动蛋白与E-钙粘连素的蛋白及mRNA表达均与空白对照组无显著差异(P >0.05)。④与空白对照组相比较，延迟加入组各时间点的α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达逐渐增加(P <0.05), E-钙粘连素蛋白的表达逐渐减少(P <0.05)，但72 h时E-钙粘连素蛋白表达接近空白对照组。结果表明Notch1受体阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能够阻断、部分逆转转化生长因子β1所诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化，但不能完全逆转其所诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化。