慢病毒载体构建小鼠CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞系
熊玮1
董少红1
张键2
李江华1
吴美善1
廖碧红1
庞新利1
罗林杰1
1.暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院心内科,广东省深圳市,5180202.中国科学院深圳先进技术研究院,广东省深圳市,518055
摘要：背景:趋化素在动脉粥样硬化时的表达水平上调,趋化素及其受体CMKLR1可能参与了动脉粥样硬化的病理过程.目的:建立CMKLR1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株.方法:以小鼠CMKLR1基因mRNA序列作为干扰靶点,设计3组靶向CMKLR1基因的shRNA序列,构建慢病毒载体,筛选出干扰最佳的shRNA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定.体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用real-time PCR检测感染慢病毒后细胞中CMKLR1 mRNA水平.结果与结论:基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为8.7×106 TU/mL,pLVX-shRNA3对CMKLR1基因的抑制效果最显著(P < 0.001).将pLVX-shRNA3转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中CMKLR1 mRNA水平,该细胞株中CMKLR1 mRNA水平显著下降(P < 0.001),表明慢病毒介导的siRNA可有效沉默小鼠血管平滑肌细胞中CMKLR1基因的表达.
关键词：组织构建组织工程血管平滑肌细胞趋化素CMKLR1RNA干扰慢病毒
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：深圳市科技创新项目(201201022)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3195-3199 )
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