制备转基因模型小鼠的基础：人白细胞抗原A*0206基因慢病毒载体构建及鉴定
张修彦
詹纯列
张晓玉
1.广州军区广州总医院动物实验中心,广东省广州市,5100102.广州军区广州总医院动物实验中心,广东省广州市,5100103.广州军区广州总医院动物实验中心,广东省广州市,510010
摘要：背景：有研究表明人白细胞抗原-A*0206亚型与鼻咽癌的发生正相关，但目前还没有相应的转基因动物模型，以用于从整体水平评价HLA-A*0206与鼻咽癌的关系及进一步研究免疫和基因疗法。目的：构建 pLVX-CMV-人白细胞抗原-A*0206-HA-mCMV-ZsGreen 载体，并进行病毒包装，以用于HLA-A*0206转基因小鼠制作。方法：合成HLA-A*0206序列，利用聚合酶链式反应在5’端引入Eco RⅠ酶切位点，在3’端引入Bam HⅠ酶切位点和流感病毒血凝素标签，Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切目的片段及pLVX-CMV-mCMV-ZsGreen质粒，连接酶切产物，转化到大肠杆菌 JM109感受态细胞，双酶切及测序鉴定阳性重组质粒，阳性重组质粒与四质粒包装系统共转染表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系293T细胞，产生含目的基因的慢病毒。结果与结论：凝胶电泳及测序证实人白细胞抗原A*0206基因成功导入pLVX-CMV-mCMV-ZsGreen骨架质粒，转染293T细胞48 h后的转染率为92%。荧光法测定病毒滴度，获得病毒滴度约为5×108。结果证实，实验成功构建了含巨细胞病毒启动子、HLA-A*0206、流感病毒血凝素标签以及ZsGreen报告基因的慢病毒。
关键词：组织构建组织工程鼻咽癌转基因小鼠慢病毒人白细胞抗原绿色荧光蛋白四质粒包装系统流感病毒血凝素巨细胞病毒启动子质粒
分类号：R318(医用一般科学)
资助基金：广东省科技厅科技基础条件建设项目(2011B060300020)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 3813-3817 )
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